化痰通脉饮对PCOS的IRS-1-PI3K/AKT/NF-κB串流失控的调节效应研究

Polycystic ovary syndrome (PCOS) is a common gynecological diseases, insulin resistance is an important endocrine characteristics. Impaired endothelial function and insulin resistance are important aspects of the pathology .Chronic low-grade inflammation is a bridge connecting the two.IRS-1-PI3K/AKT and NF- κ B cross talk mediated resistance and vascular endothelial function impaired insulin.We will study the pathophysiological mechanism of PCOS by the key link that NF- κ B and IRS-1-PI3K/AKT's cross talk out of control and cause vascular endothelial injury and insulin resistance ,to test NF- κ B P65、IRS-1、 IKK、 AKT、 PI3K protein of rat PCOS model by Western Blot; test CRP、 TNF- α、 IL-1 β、 IL-18、 IL-6、 ICAM-1、 PAI-1 by ELISA, explore the prescription of Huatantongmai treatment effect on PCOS, to evidence that "The cemente of Phlegm and blood stasis"is the traditional Chinese Medicine pathogeny of PCOS and provide an objective basis for the treatment of PCOS to the principle of The treatment both phlegm and blood stasis.

多囊卵巢综合征（PCOS）是妇科常见病，胰岛素抵抗与血管内皮损伤是重要的病理环节，这与中医"痰瘀互结"病机相通。IRS-1-PI3K/AKT与NF-κB 串流失控介导胰岛素抵抗与血管内皮功能受损。本研究从IRS-1-PI3K/AKT介导PCOS胰岛素抵抗与NF-κB介导血管内皮损伤及两者"串流"失控在PCOS发生发展中的关键环节探讨PCOS的病理生理机制，运用Western Blot法检测PCOS模型大鼠组织NF-κB P65、IRS-1、IKK、AKT、 PI3K 蛋白；ELISA 检测血清CRP、TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-6、ICAM-1、PAI-1的变化，探讨化痰通脉饮对PCOS的调节效应，佐证PCOS中医的"痰瘀相关"机理，为中医药"痰瘀同治"治疗PCOS提供客观依据。

本课题研究了化痰通脉饮对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome , PCOS）大鼠模型胰岛素受体底-1-磷脂酰肌醇-3激酶(IRS-1-PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)及核因子-κB(NF-κB)信号串流的影响，结果表明，与正常组比较，模型组肝脏中IRS-1、Akt、PI3K和IκB蛋白的表达明显降低（P<0.05），NF-κB（P65）蛋白的表达明显升高（P<0.05）；与模型组比较，复方高剂量组大鼠的肝脏中IRS-1、Akt、PI3K和IκB蛋白的表达明显升高（P<0.05），NF-κB（P65）蛋白的表达明显低于模型组（P<0.05）。为了深入研究PCOS的发病机制，通过基于1H-NMR的代谢组学代谢组学技术对模型大鼠的尿液进行分析，共发现12个潜在生物标记物与PCOS发病过程相关，分别为精氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、尿素、柠檬酸、肌酐、赖氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、葡萄糖、甘油磷酸胆碱和肌醇，发现了多个代谢通路包括糖酵解，TCA循环，磷酸肌醇代谢，甘油磷脂代谢，赖氨酸代谢，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，苯丙氨酸代谢，色氨酸代谢，精氨酸和脯氨酸代谢与PCOS的病理生理机制相关。更进一步的，采用UPLC-Q-TOF/MS技术分析化痰通脉饮中的多种成分，正离子模式下共初步鉴别鉴别出29个化合物；负离子模式下初步鉴别出28个化合物。同时，分别采用了测量体重，ELISA 检测血清胰岛素（INS），生化检测高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG）的方法评价了化痰通脉饮对模型大鼠的胰岛素抵抗及脂质代谢紊乱的影响。结果表明，化痰通脉饮中、高剂量组均能从不同程度上减少PCOS大鼠的体重增加和血液中LDC-C、TG和INS水平的显著上升，并降低PCOS大鼠的胰岛素水平。通过网络药理学方法，研究半夏-当归药对治疗多囊卵巢综合症的作用，从中药系统药理学分析平台(TCMSP)结合文献检索，分析预测潜在作用靶点，通过生物学信息注释数据库 (DAVID) 进行代谢通路进行富集分析, 构建 “成分-靶点-通路”网络模型，从半夏中共选出具有抗PCOS活性潜在活性成分26个，相关靶点169个，从当归中共筛选出潜在活性成分14个，相关靶点56个。为进一步阐明该复方的配伍机制提供了科学依据。