miRNA-222靶作用于CYLD基因致肝衰竭中NF-kappaB通路持续激活的正反馈机制研究

Liver failure is a severe inability of the liver to perform its normal synthetic and metabolic function, as clinically characterized by jaundice, ascites, encephalopathy and coagulopathy, which may lead to multiple organ failures and death. The excessive inflammatory response plays a pivotal role in the pathogenesis of liver failure, but the mechanisms involved are still remain not fully understood. The cylindromatosis gene CYLD is a cornerstone of the inflammatory response and could control over NF-kappaB mediated inflammation. Preliminary work of our group found that the serum miRNA-222 levels were significantly higher in liver failure patients and have positive correlation of prothrombin time. The PBMC CYLD levels reduced in liver failure patients, and CYLD may be the direct target of miRNA-222. Our study is supposed to verify miR-222 acts through CYLD to activate the NF-kappaB signaling pathway in cell lines and in vivo model; build a prospective cohort to analyze serum miRNA-222 levels with the prognosis of liver failure patients. This study help identify the novel mechanism of miRNA-222 acts through CYLD to activate the NF-kappaB pathway and to develop new insights on the liver failure therapy.

肝衰竭是多种原因引起的以凝血机制障碍、黄疸、肝性脑病、腹水为表现的临床症候群，死亡率高。过度炎症引起的免疫性损伤是该病主要发病机制，目前对过度炎症发生的机制尚不完全清楚。CYLD是去泛素化酶家族一员，对NF-kappaB相关的炎症通路起负调控作用。课题组前期工作发现在肝衰竭患者的血清中miRNA-222表达升高且与凝血酶原时间延长显著相关，在患者PBMC中发现CYLD表达下降，且CYLD极有可能为miRNA-222的靶位基因。本研究拟通过细胞功能实验和急性肝衰竭动物模型验证分析miRNA-222通过作用靶位基因CYLD调控NF-kappaB通路激活和相关细胞因子分泌；并建立前瞻性队列分析患者血清miRNA-222的表达对病情进展和预后的影响。这些研究将阐明肝衰竭中miRNA-222可能通过调节靶位基因CYLD影响NF-kappaB通路，造成过度炎症因子分泌，为治疗肝衰竭提供新的理论和策略。

背景：肝衰竭是多种原因引起的以凝血机制障碍、黄疸、肝性脑病、腹水为表现的临床症候群， 死亡率高。过度炎症引起的免疫性损伤是该病主要发病机制，目前对过度炎症发生的机制尚不完全清楚。CYLD是去泛素化酶家族一员，对NF-kappaB相关的炎症通路起负调控作用。.主要研究内容：建立HBV-ACLF回顾性和前瞻性队列，分析影响HBV-ACLF预后的危险因素，比较不同评分模型对HBV-ACLF预后预测的准确性，动态评估ACLF患者病程与预后的关系，优化紧急肝移植手术指征。检测HBV-ACLF患者血浆促炎因子表达水平，分析HBV-ACLF患者肝组织病理特征及转录组表达谱，检测CYLD在ACLF外周血和肝组织的表达水平，研究CYLD在肝衰竭发病机制中的作用。检测HBV-ACLF患者外周血各种补体表达水平，分析它们与ACLF预后的相关性。研究血清HBV-RNA水平与肝内cccDNA转录活性的关系，血清HBV-RNA水平接受核苷类似物治疗的慢乙肝炎患者的肝脏组织学变化的关系。...重要结果：COSSH-ACLF评分对轻度、重度患者的短期和中期预后具有最佳的预测能力。诊断后3-7天再评估HBV-ACLF病情较初始评估对预后的预测更准确，初始ACLF-3及第3-7天为ACLF-2或-3的HBV-ACLF患者建议优先紧急肝移植。.HBV-ACLF患者外周血血浆促炎因子明显升高，肝组织HE染色、免疫组化和转录组测序均提示，HBV-ACLF患者处于炎症反应过激、大量趋化因子分泌，吸引中性粒细胞浸润至肝脏的状态。做为具有抑炎作用的CYLD在肝衰竭患者表达下调进一步加重的肝衰竭的过度炎症的状态，细胞学实验也证明，CYLD敲除组细胞NF-kB通路的激活更加明显，促炎因子、趋化因子分泌显著升高。.HBV-ACLF患者血浆C3C1q, C3, C3a, C4, C4a 和sC5b-9的表达量均明显低于CHB及健康对照。其中C3表达量与MELD评分呈负相关。.血清HBV-RNA水平可指示cccDNA的肝内转录活性，并与接受核苷类似物治疗的慢乙肝炎患者的肝脏组织学变化有关。..科学意义：比较不同终末期肝病评分模型有助于临床医生准确的评估肝衰竭患者预后，动态分析肝衰竭病情变化有助于优化紧急肝移植手术指征。CYLD通过NF-kB调控促炎因子、趋化因子影响肝衰竭疾病严重程度这一机制为肝衰竭患者治疗提供了新思路。