藏药甘扎嘎日治疗瘟热病药效物质及其活性-作用机制研究

Respiratory viruses cause acute respiratory infection disease that often contains fever, pneumonia, pain and other clinical symptoms, which is part of febrile disease category in the Tibetan medicine. Tibetan medicine has a certain advantage in the prevention and treatment of epidemic febrile disease. From clinical application of Tibetan medicine, the effect of treatment with distemper molding, cold plague, Mubu diesease. And the modern medicine find that distemper molding, cold plague, Mubu diesease can be caused by viral infection of the respiratory tract. It is a classic medicine of treatment with distemper in the Tibetan medicine, Kandrakari has well effect thermal forming on acute communicable diseases and can clearing heat and anti-inflammatory in Tibetan medicine, but to this day, it is not clear what is the active compounds of treatment febrile disease (anti RSV, anti inflammatory) in Kandrakari and what is the mechanism of action? Therefore, chemical composition in Tibetan medicine Kandrakari is taken as the focus in this topic to isolation, identification and screening the active compound systematically; And then probed the mechanism of anti- RSV based on RhoA / ROCK signal pathway; based on TLR-MyD88-NF - K B signaling pathways to explored the mechanism of anti-inflammatory active compounds. The distinction and innovations are: (1) First expounding the anti-inflammatory effective substance in Kandrakari. (2) Expounding Anti- inflammatory mechanism of active composition in Kandrakari for the first time. (3) For the first time providing a good method for developing Tibetan medicine by the study of Anti-inflammatory mechanism of active composition in Kandrakari.

呼吸道病毒引起的急性呼吸道感染疾病，常有发热、肺炎、疼痛等临床症状，藏医学中属温热病范畴，藏医药在预防和治疗温热病方面具有一定优势。藏医临床应用提示，藏药甘扎嘎日具有治疗瘟热成型、感冒疫疠、木布病的功效，现代医学发现，这些疾病都可以通过呼吸道病毒感染而诱发。甘扎嘎日作为具有治疗瘟热病的藏医经典单方，但其中治疗瘟热病（抗RSV、抗炎）的活性成分是什么？其作用机理如何？目前尚不清楚。为此，本课题以藏药甘扎嘎日化学成分为重点，系统分离、鉴定和筛选甘扎嘎日治疗瘟热病（抗RSV、抗炎）的效应成分；基于RhoA/ROCK信号通路探讨其抗RSV作用机理；基于TLR-MyD88-NF-κB信号通路探讨其抗炎活性成分作用机理。其特色与创新主要体现在，首次开展藏药甘扎嘎日治疗瘟热病（抗RSV、抗炎）的药效物质及其作用机理研究；丰富甘扎嘎日药效成分内涵，为藏药制剂的开发应用尝试可借鉴的研究思路和方法。

目前关于甘扎嘎日活性成分的研究报道较少，甘扎嘎日活性成分研究有助于完善和充实其药效物质基础内涵，对甘扎嘎日药材的种植、采收、质量控制和评价，以及临床合理应用等具有基础性作用。筛选甘扎嘎日抗病毒和抗炎活性成分、阐明其作用机制，对寻找抗病毒和抗炎有效成分或先导化合物，进而实现药物开发具有实用价值。课题从甘扎嘎日中分离鉴定出80多种化学成分，其中， 4-乙酰氧基-3-甲氧基苯甲酸为一新天然产物。2-羟基苯甲酸-6-O-β-D-葡萄糖苷、(2S,3R)-2,3-二羟基-7-羟基-3-羟基甲基-2-（4′-羟基-3′-苯甲氧基）5-苯并呋喃丙醇-3a-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、1,2,8-三甲氧基-6-羟基酮、1,8-二羟基-3,7-二甲氧基酮、1-羟基-3,7,8-三甲氧基酮、1,8-二羟基-3,5-二甲氧基酮为首次从蔷薇科植物中分离得到。 (+)-儿茶素与(-)-表儿茶素为首次从悬钩子属植物中分离得到。金丝桃苷、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、secoisolariciresinol-O-α-L-rhamnopyranoside外，其余化合物首次从甘扎嘎日中分离得到。新成分的发现为进一步完善和优化甘扎嘎日药材及其复方制剂的质量控制提供了更多的参考指标。甘扎嘎日提取物中乙酸乙酯萃取部位和氯仿萃取具有一定的抗病毒作用，其对病毒穿入细胞后的抑制作用强于对病毒侵入细胞的阻断作用和对病毒的直接灭活作用，其中甘扎嘎日提取物乙酸乙酯萃取部位对PR8病毒的抑制作用最强。甘扎嘎日提取物乙酸乙酯萃取部位在一定浓度范围内对NO分泌有显著抑制作用。槲皮素和山奈酚均能抑制炎症细胞因子 TNF-α、IL-1β 和 IL-6。另外，课题还研究了藏医常用三种甘扎嘎日药材的质量对比研究；建立了甘扎嘎日药材中金丝桃苷的HPLC含量测定方法。对不同产地甘扎嘎日药材中营养成分进行了定量定性分析，还开展了甘扎嘎日药材中的糖类化学成分研究。用分子模拟评价及TOPKAT毒性预测相结合的评价方法，对甘扎嘎日化学成分的抗氧化活性进行研究。