从GABA调控探讨调理脾胃方对水杨酸钠耳鸣模型大鼠的作用机制研究

Our previous studies found that the Spleen-Stomach Regulating Prescription(SSRP) on the tinnitus has a good clinical effect,however, its mechanism remains uncertain.It is generally accepted that the increasing of the neuronal excitability induced by the imparied function of GABAergic inhibition in central auditory system may be one of the causes of tinnitus.Other research has show that it is an effective strategy for treatment of tinnitus to recover impaired GABAergic.Therefore, this paper puts forward the hypothesis that the mechanism of the SSRP on the tinnitus may be associated with the hange of the GABAergic.Inorder to verify the hypothesis，the changes before and after they were treated with SSRP of the rats behavior and the changes of the contents of the GABA and its receptor (GABAA and GABAB) tested by immunohistochemistry method(IHC) and reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) will be recorded and analyzed.According to the results,we will explore the mechanism of the SSRP on the tinnitus,so as to provide reference for clinical application.

课题组前期研究发现调理脾胃方治疗耳鸣有较好的临床疗效，但其作用机制尚不清楚。一般认为由于听觉中枢系统GABA能抑制功能的改变导致的神经元兴奋性提高可能是耳鸣产生的原因之一。有研究显示，恢复受损的GABA能系统是治疗水杨酸钠耳鸣模型大鼠的有效策略。因此，本课题提出“调理脾胃方治疗耳鸣的作用机制可能与GABA能抑制功能的改变有关”的假说。为了验证该假说，本研究拟通过观察调理脾胃前后各组水杨酸钠耳鸣模型大鼠的行为学改变，并运用免疫组化法(IHC)和反转录-多聚酶链反应法（RT-PCR）分别检测其下丘GABA及其受体（GABAA和GABAB）含量的变化，探讨调理脾胃方治疗耳鸣的作用机制，为调理脾胃方治疗耳鸣的临床应用提供参考依据。

课题组前期以《内经》中“耳鸣……肠胃之所生……”的理论为基础拟定的调理脾胃方治疗耳鸣取得了较好的临床疗效，但其作用机制尚不清楚。有研究认为听觉中枢系统GABA能抑制功能的改变导致的神经元兴奋性提高可能是导致耳鸣的原因之一。因此，为了验证“调理脾胃方在临床上治疗耳鸣取得了较好的疗效，其作用机制可能与GABA能抑制功能的改变有关”的假说，本研究将Wistar大鼠采用随机数字表法分成空白对照组、耳鸣模型组和中药治疗组，采用生大黄煎剂灌胃及模拟饥饱失常制造脾胃虚弱型模型大鼠后再用腹腔注射水杨酸钠制造耳鸣模型，灌胃调理脾胃方治疗后通过饮水抑制法观察大鼠行为学改变，结果发现调理脾胃方能加快水杨酸钠耳鸣模型大鼠的耳鸣缓解速度。后将大鼠过量麻醉处死取出下丘及海马，免疫组化检测下丘中GABA的表达情况，qPCR检测下丘中GABAA和GABAB的表达情况，结果显示，与空白对照组相比，耳鸣模型组中GABA及其受体（GABAA和GABAB）的表达量下调，调理脾胃方处理后GABA及其受体（GABAA和GABAB）表达升高。可见，调理脾胃方可以通过恢复受损的GABA能抑制功能来实现治疗耳鸣的目的。同时，我们还qPCR和WB检测了海马区5-HT1A及5-HT2A受体水平变化情况，其基本与GABA变化一致。接下来我们将采用全细胞膜片钳技术记录GABA能神经元的内在膜特性和突触传递活动变化情况进一步探究不同浓度的调理脾胃方治疗耳鸣的分子机制。并进一步研究水杨酸钠致5-HT水平升高的信号通路及其与GABA之间的相互关系，探讨如何避开水杨酸钠对听觉中枢和外周的影响以明确边缘系统与中枢系统在耳鸣发生发展过程中的主次关系。以进一步揭示调理脾胃方治疗脾胃虚弱型耳鸣的作用机制，为其临床应用提供参考依据。