TfR-ScFv-LH-姜黄素靶向治疗激素非依赖性前列腺癌的实验研究

激素非依赖性前列腺癌（AIPC）的放化疗效果较差，其治疗是临床棘手难题之一。姜黄素能通过多条信号通路和调节相关肿瘤因子在体外有效抑制AIPC细胞增殖并诱导凋亡。但姜黄素难溶于水，在体外容易被氧化；且在肠道吸收过程中易发生转化，很大程度限制了姜黄素的临床应用。新型免疫靶向载体系统能将药物安全高效的导入肿瘤细胞内，发挥靶向抗瘤效应。靶向导入的药物在肿瘤部位保存相对高的浓度，延长了作用时间，提高了对肿瘤细胞的杀伤力，而对正常细胞影响较小。本课题组拟在前期成功构建抗转铁蛋白受体单链抗体（TfR-ScFv）的基础上制备TfR-ScFv-LH-姜黄素耦合物，研究该耦合物在体内外对前列腺癌细胞生物学行为的影响并探讨其可能的机制，并检测它对前列腺癌组织和细胞的靶向性，并进一步研究D2C增强TfR-ScFv-LH-姜黄素耦合物抗瘤效应的机制，为前列腺癌的生物靶向治疗提供新的思路。

1.姜黄素能在体外显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡并导致细胞周期的阻滞。2.姜黄素能在体外显著抑制NF-κB和AP-1两个细胞内信号通路的活性(P <0.05)，而对Elk1、CHOP和CREB三个信号通路的活性影响不明显。姜黄素可能通过抑制NF-κB和AP-1信号通路发挥抑癌效应。3. 抗人TfR mAb对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期无显著影响(P >0. 05)。姜黄素能够显著上调雄激素非依赖性前列腺癌细胞表面TfR表达（P< 0.05）。抗人TfR mAb可显著增强姜黄素对PC-3细胞凋亡的诱导作用(P <0. 05)，而不影响姜黄素对PC-3细胞增殖和细胞周期的影响(P>0. 05)。抗人TfR mAb单独作用对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生物学行为无显著影响，但抗人TfR mAb可以增强姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞的凋亡效应。4. MTT结果显示姜黄素对DU145和PC3细胞活性的抑制作用呈浓度依赖性(P<0. 05)，3-MA增强姜黄素的细胞毒性作用(P<0. 05)；流式、免疫荧光结果均显示姜黄素诱导DU145和PC3细胞凋亡(P<0. 05)；扫描电镜见大量自噬体形成；Western blot显示caspase 3、caspase 9活化，LC3-Ⅱ、TfR1、IRP1表达水平上升 ( P < 0. 05)，且上述效应均可被等量FAC逆转。姜黄素在体外诱导CRPC凋亡和保护性自噬的作用与其铁螯合剂属性密切相关。5. TfR-mAb增强姜黄素诱导去势抵抗性前列腺癌细胞凋亡和自噬的效应，干扰铁代谢并抑制AKT磷酸化可能是二者协同作用的机制。6.姜黄素对人前列腺癌PC-3细胞裸鼠移植瘤有抑制增殖、促进凋亡的作用，并且在TfR mAb联合作用下可以更加高效地通过降低肿瘤细胞内铁离子水平而使姜黄素的抗肿瘤效应得到增强。