睡眠呼吸暂停模式间歇低氧诱导的T淋巴细胞亚群促内皮细胞凋亡效应与分子机制研究

Intermittent hypoxia (IH), a hallmark feature in obstructive sleep apnea (OSA), is a basic pathophysiological factor leading to vascular endothelial injury and dysfunction which is responsible for atherosclerosis and other cardiovascular diseases.Our previous research revealed that lymphocytes from intermittent hypoxic rats increased the apoptotic signals in endothelial cells via oxidative and inflammatory injury in vitro. Base on the previous results, this program will investigate the in vitro proapoptotic effect and mechanisms of CD4 and CD8 T cells, from rat models in different IH styles of OSA, on vascular endothelial cells. Firstly, the adhesion capacity and endothelial apoptosis will be evaluated. Furthermore, the biomarkers of mitochondria dysfunction and endoplasmic reticular stress pathways will also be determined to clarify the inherent mechanisms. Finally, the interventional role of tempol will be investigated. This program will shed lights on the mechanism of vascular endothelial injury mediated by lymphocytes induced by IH in OSA and develop new strategy and approach for the effective prevention and treatment of cardiovascular complications associated with OSA syndromes.

阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)模式间歇低氧(IH)是引发血管内皮损伤及功能障碍，继而导致动脉粥样硬化等心血管并发症最主要的病理生理学因素。课题组前期研究表明IH环境淋巴细胞基于氧化应激和炎症反应，增加了血管内皮细胞促凋亡信号。本课题拟在前期研究基础上分离CD4、CD8T细胞，进一步探讨T淋巴细胞亚群介导的内皮细胞凋亡、分子机制以及抗氧化干预效应。建造OSA模式IH大鼠模型并分离CD4、CD8T细胞，分别与血管内皮细胞共培养，测定粘附以及内皮细胞凋亡状态；测定线粒体损伤和内质网应激相关凋亡机制指标；并在抗氧化干预后重复测定和比较。本研究对揭示OSA模式IH环境淋巴细胞诱发内皮系统损伤的亚群细胞基础和分子机制，发现OSA患者并发心血管疾病的有效干预策略具有重要理论意义。

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）是常见的呼吸系统疾病，具有较高的发病率、致残率和病死率，也是许多心血管疾病尤其是高血压和冠心病的独立危险因素。近年来，自噬在OSAS发病机制中的作用受到关注。有数据表明，自噬可能在OSAS患者慢性间歇性缺氧驱动的系统过程中发挥作用。近年来研究发现，OSAS患者循环血中凋亡内皮细胞明显增加，凋亡内皮细胞增加与异常内皮血管舒张功能相关，可作为反映内皮功能障碍的新指标，故本次研究的目的在于研究自噬在OSAS疾病中的作用。. 本研究通过建立间歇低氧细胞模型，模拟OSA模式，通过透射电镜、western blot、RT-PCR、单丹磺酰尸胺（MDC）染色等方法与技术，对HUVECs内自噬现象的发生进行了初步研究。通过加入自噬抑制剂3-MA干预自噬，经western blot及流式细胞术探讨了自噬与凋亡之间关系，并应有ELISA等方法研究了自噬对内皮细胞功能的影响。. 通过建立不同程度的间歇低氧细胞模型，透射电镜显示，IH环境培养下的HUVECs能够观察到自噬小体的存在。RT-PCR及Western blot结果显示，IH环境下，HUVECs自噬相关基因及蛋白的表达上调。MDC法提示随IH时间的延长，细胞内自噬小体的出现明显增加，自噬与间歇低氧时间之间存在相关性。经自噬抑制剂3-MA作用HUVECs后，通过western blot检测凋亡相关蛋白及流式细胞仪检测细胞凋亡水平，发现自噬可抑制HUVECs凋亡。通过检测HUVECs内皮功能，发现与IH组比较，抑制自噬后，VEGF、ET-1升高，NO水平下降，提示自噬有保护内皮功能的作用。