LncRNA-BX357664通过GRHL2调控肾癌侵袭和转移性的机制研究

Renal cell carcinoma is a common malignant tumor of the urinary system, and lncRNAs is proved to have a close relationship with the development of tumor. The gene chips showed that lncRNA-BX357664 and its downstream gene GRHL2 were down-regulated significantly in RCC. While over-expressing the lncRNA-BX357664, GRHL2 was also found to be up-regulated. Also, GRHL2 was showed to suppress the TGF-β pathway and its induced EMT process. All these imply that lncRNA-BX357664 may affect TGF-β pathway and EMT process by regulating GRHL2 and participate in the regulation of tumor invasion and metastasis. In this study, we plan to verify that lncRNA-BX357664 could regulate GRHL2, and affect the TGF-β pathway and EMT process, thereby regulate the invasion and metastasis of RCC. Then, with the help of Co-IP and liquid chromatography-mass spectrometry, we plan to find the key protein participating in the regulation of the GRHL2. Finally, by analyzing the relationship between lncRNA-BX357664 and clinical stage, disease progression, treatment effect or prognosis of the patients, we want to provide new reference indicators and ideas for the diagnosis, treatment and prognosis of renal cell carcinoma.

肾癌是泌尿系常见的恶性肿瘤，而lncRNA与肿瘤的发生、发展存在密切联系。本课题前期基因芯片筛查发现lncRNA-BX357664及其下游基因GRHL2在肾癌组织中明显表达下调，过表达lncRNA-BX357664后GRHL2的表达亦随之增高，而GRHL2可以抑制TGF-β通路及其导致的EMT过程，提示lncRNA-BX357664可通过调控GRHL2 的表达，影响TGF-β通路及EMT过程，参与肾癌侵袭和转移性的调控。本研究拟从体内、外水平探究lncRNA-BX357664通过GRHL2影响TGF-β通路及EMT过程进而调控肾癌侵袭和转移性的具体机制；应用免疫共沉淀和液态质谱筛选参与GRHL2调控的关键蛋白，进一步阐明GRHL2对肾癌侵袭和转移性的调控机制；探索分析lncRNA-BX357664与肾癌的临床分期、疾病进展、治疗效果及预后情况等的关系。

目的：长链非编码RNA（lncRNAs）是一类已经被证明不具有翻译能力而且在多种恶性肿瘤中呈现出差异性表达的RNA。先前的芯片结果发现lncRNA BX357664在肾透明细胞癌（简称肾癌，renal cell carcinoma，RCC）中呈显著低表达，但其对肾癌中调控方式以及作用机制仍然未被揭示。本研究旨在探索lncRNA BX357664在肾癌组织中的表达水平以及进一步探究其对肾癌的调控方式和内在机制。.材料和方法：先前的Microarray实验芯片结果提示lncRNA BX357664在5名肾癌患者的肿瘤组织中呈低表达，采用qRT-PCR验证40对肾癌组织和对应瘤旁正常组织以及2株肾透明细胞癌细胞株和1株正常人胚肾细胞中lncRNA BX357664的表达水平。流式细胞术和CCK8细胞增殖实验评估lncRNA BX357664对肾癌细胞周期改变以及增殖活性的影响，Transwell实验评估其对肾癌细胞迁移和侵袭能力的调控。Western Blot实验分析上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相关蛋白以及肿瘤转移相关的TGF-beta 1/p38/HSP27信号通路的影响。.结果：芯片结果和qRT-PCR结果显示，与癌旁无瘤组织对比，lncRNA BX357664在肾癌组织中的表达程度明显减低（P<0.05）；在肾癌细胞中上调lncRNA BX357664能够使细胞出现G0/G1期阻滞（P<0.05），显著抑制肾癌细胞的增殖活性（P<0.05）。上调lncRNA BX357664能够通过下调TGF-beta 1的蛋白表达水平从而弱化TGF-beta 1/p38/HSP27信号通路的磷酸化，影响上皮间质转化关联蛋白的表达程度，包括上皮表型蛋白E钙黏蛋白表达升高（P<0.05）和间质表型蛋白N钙黏蛋白、波形蛋白表达降低（P<0.05），从而抑制肾癌细胞的迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.05）的能力。.结论：在肾癌中，lncRNA BX357664可以作为一种新发现的肿瘤抑制基因，通过抑制TGF-beta 1/p38/HSP27信号通路的活化从而对肾癌细胞的发生发展起到一定抑制作用。