辐射损伤后自体脂肪干细胞诱导分化为甲状腺细胞的研究

131I治疗甲状腺功能亢进症的最大不足是出现甲状腺功能减低症，尤其是永久性甲减，需要终生服用甲状腺素替代治疗。干细胞的诱导分化技术为甲减治疗提供了新的思路。目前的研究表明，胚胎干细胞可以体外诱导分化为甲状腺细胞，但分化率较低，体外简单的生长条件使得诱导细胞并不完全具备成体甲状腺细胞的分泌功能；而体内诱导胚胎干细胞分化为甲状腺细胞由于存在物种间的排异等问题未取得突破性进展。近年研究发现，成体干细胞能跨越胚层界限"横向"分化，其可塑性潜能可以使成体脂肪干细胞诱导分化为甲状腺细胞，为干细胞治疗甲状腺功能减低症提供了新的希望，尤其是可以避免体内诱导时出现的物种间排异。本课题将通过辐射损伤模型和体内、外实验，诱导自体脂肪干细胞分化为甲状腺细胞，采用现代分子生物学技术鉴定细胞功能，探讨成体脂肪干细胞诱导分化为甲状腺细胞的可能性，为干细胞临床治疗辐射损伤所致甲减提供理论依据。

本研究重点探索ADSCs诱导分化为甲状腺细胞的可行性，证实兔脂肪干细胞在一定的培养条件和诱导因子作用下，可定向分化为甲状腺细胞。实验通过观察ADSCs形态与增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，免疫荧光鉴定其E-cadherin、OCT-3/4、CD44表达情况；取培养较好的ADSCs，添加诱导因子TSH、KI及Insulin，体外诱导ADSCs向甲状腺细胞分化。倒置显微镜下观察ADSCs细胞诱导分化中的形态变化，通过常规RT-PCR法鉴定甲状腺相关基因如PAX-8、NIS、TSHR、TPO、Tg的表达，通过激光共聚焦显微镜双色荧光观察PAX-8和TTF1的共表达情况，电子显微镜观察诱导细胞的超微结构，寻找存在的内分泌颗粒。结论认为兔脂肪干细胞在一定的培养条件和诱导因子作用下，可定向分化为甲状腺细胞。其中：①诱导细胞有一定的摄碘功能，但又低于正常甲状腺细胞；②部分诱导细胞的高尔基体、内质网丰富，具备一定的合成、分泌功能。目前，本课题仍在继续寻找ADSCs诱导移植治疗甲低的证据。