蛋白磷酸酶1对桩蛋白在黏附斑中定位的影响对恶性黑色素瘤转移的作用机制研究

Epithelial to mesenchymal transition（EMT）is important to malignant melanoma（MM ）metastasis. Focal adhesion is one of key points of EMT. Paxillin is central in focal adhesion. Protein phosphotase2A (PP2A) can dephosphorylate the serine of paxillin, and change the localization of paxillin in focal adhesion, therefore inhibit pulmanory cancer cells movement. We found that protein phosphotase 1 (PP1) which is highly allied with PP2A was higher expressed in non-metastatic MM compared with metastatic MM. This project is planned to watch the interaction between PP1 and paxillin using co-immunoprecipitation in vitro; to construct PP1 eukaryotic expression vector and siRNA and to examine PP1 activity using protein phosphotase kit; to watch the localization of paxillin in focal adhesion using immunofluorescence; to watch the movement changes of MM cells using transwell test. We also plan to identify the effect of PP1 on paxillin in vivo using animal models and human MM tissue arrays. We also plan to increase the number of cases and explore the relation of MM metastasis with life span. We want to explore the mechanism of PP1's effect on the localization of paxillin in focal adhesion, and to understand the metastsis mechanism of MM, hoping to explore new directions of metastasis mechanism of MM and cancer.

上皮间质转化（EMT）对恶性黑色素瘤（MM）转移起重要作用。黏附连接是EMT重要环节之一。桩蛋白处于黏附连接中心地位。蛋白磷酸酶2A使肺癌细胞桩蛋白丝氨酸脱磷酸，改变其在黏附斑中的定位，抑制肿瘤细胞移动。我们发现与PP2A高度同源的蛋白磷酸酶-1（PP1）在非转移MM中的表达明显高于转移MM中表达，由此推测PP1对MM桩蛋白的脱磷酸是否可以改变其在黏附斑中的定位，从而影响肿瘤转移。本项目拟在体外环境下利用转移性MM细胞及非转移性MM细胞过表达或沉默PP1，免疫共沉淀观察PP1与桩蛋白的相互作用；免疫荧光观察桩蛋白在黏附斑中定位；transwell实验观察细胞移动。建立动物模型及利用人MM组织芯片观察PP1在体内环境下对桩蛋白的作用。扩大随访病例，Meta分析PP1与MM转移及生存期之间的关系。旨在探讨PP1对桩蛋白在黏附斑中定位的影响对MM转移的作用机理，以期为肿瘤转移机制研究开辟新方向。

研究背景：上皮间质转化（EMT）对恶性黑色素瘤（MM）转移起重要作用。黏附连接是EMT重要环节之一。桩蛋白处于黏附连接中心地位。蛋白磷酸酶2A使肺癌细胞桩蛋白丝氨酸脱磷酸，改变其在黏附斑中的定位，抑制肿瘤细胞移动。我们发现与PP2A高度同源的蛋白磷酸酶-1（PP1）在非转移MM中的表达明显高于转移MM中表达，由此推测PP1对MM桩蛋白的脱磷酸是否可以改变其在黏附斑中的定位，从而影响肿瘤转移。.研究内容：(1).体外环境下利用转移性MM细胞及非转移性MM细胞过表达或沉默PP1，免疫共沉淀观察PP1与桩蛋白的相互作用；免疫荧光观察桩蛋白在黏附斑中定位；transwell实验观察细胞移动。建立动物模型及利用人MM组织芯片观察PP1在体内环境下对桩蛋白的作用。.(2).利用免疫组化方法分别检测桩蛋白在胰腺癌组织中及正常胰腺组织中的表达情况。.(3).研究对于胰腺颈部、体部肿瘤的患者，胰管空肠桥式导管内引流术在胰腺中段切除术中的应用。.(4).查阅有关粘附斑激酶、失巢凋亡的相关文献，对黏附斑激酶对失巢凋亡的作用与恶性肿瘤转移的进展进行论述。.结果：（1）体外环境下：明确了PP1对MM细胞桩蛋白脱磷酸化作用，对其在黏附斑中定位的影响，进而明确其对MM细胞移动的作用及分子机制，为研究MM发生转移的病理生理机制及治疗提供新的思路和靶点。体内环境下：证明了PP1与桩蛋白与MM发生转移的关系。.（2）胰腺癌组织中桩蛋白的表达阳性率明显高于正常胰腺组织，桩蛋白的表达分别与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润范围、区域淋巴结转移相关。.（3）在胰腺中段切除术中，运用胰管空肠桥式导管内引流术是一种安全有效的重建技术，并且可以使胰瘘发生的风险降低。.（4）FAK参与调控细胞失巢凋亡，而失巢凋亡的抵抗在肿瘤细胞的生存、转移过程中也起着重要的作用.意义：（1）桩蛋白与胰腺癌的发生、发展、侵袭、转移等生物学行为密切相关，可考虑作为判断胰腺癌生物学行为、预测肿瘤发展趋势的生物标记物，进一步在基因水平的研究有助于寻找胰腺癌更佳的诊断和治疗方法。.（2）更加深入的研究FAK对于抗失巢凋亡作用以及FAK抑制剂的研发可以为临床肿瘤的治疗提供新的思路和策略。.（3）胰管空肠桥式导管内引流术运用简单，安全，可靠的技术使胰液引流进小肠，达到保留部分胰腺的可能。