斯氏艾美耳球虫免疫蛋白组学及免疫机理研究

In this study, the immunoproteomic approach and the analysis of immunologic mechanisms were applied to screen potential immunogenic antigens of Eimeria stiedai. Two-dimensional electrophoresis (2-DE) and subsequent western blot technique were employed to analyse proteins of sporulated oocysts. The immunogenic antigens were identified by mass spectrometry and protein function prediction was performed by biological information analysis. The efficacy of immunization of potential antigens was evaluated by animal experimentation. The impact on liver was studied by detection of enzyme activity in liver. The serum antibody levels, lymphocyte proliferation responses, cytokines mRNA level and percentages of T lymphocyte subsets and B cells were determined to illuminate the immunologic mechanisms of the potential antigens. This study explores a new pathway for control of rabbit coccidiosis and provides technical supports to improve the quality of the laboratory rabbit.

本研究拟通过免疫蛋白组学方法及免疫机理的研究，高通量地筛选具有良好免疫原性的斯氏艾美耳球虫候选抗原。通过二维电泳技术和免疫印记方法，分析具有免疫原性的蛋白；通过质谱分析与生物信息学分析，对具有免疫原性的蛋白进行分类鉴别及功能预测；通过动物免疫试验，评价候选抗原的免疫保护作用；通过测定肝脏几种重要酶的活性，揭示候选抗原对兔肝脏功能的影响；通过测定机体抗体水平，淋巴细胞增殖反应能力，细胞因子水平，以及T细胞亚类及B细胞水平，阐明候选抗原免疫机理。本研究将为兔球虫病的防制开辟新途径，为提高我国实验兔质量提供技术支持。

兔是常用实验动物之一，被广泛应用于免疫学研究、微生物学研究、心血管疾病研究及制造诊断血清等。兔球虫病是家兔常见的危害最严重的寄生虫病，严重影响兔质量安全。本研究成功建立兔斯氏艾美耳球虫（E.stiedai）感染模型，通过结合双向电泳、免疫印迹和质谱分析的方法，兔抗E.stiedai高免血清识别具有免疫原性的蛋白，高通量筛选和鉴定出23个具有免疫原性的蛋白。通过MALDI-TOF/TOF-MS和生物信息学技术分析所识别的蛋白点，GO分析发现这些具有免疫原性的蛋白均有广泛的生物学功能。通过cDNA末端快速扩增法（RACE）获得E.stiedai的Hsp70和Asp的全基因序列，该序列已被NCBI GenBank DNA序列数据库收录，并成功表达HSP70和ASP重组蛋白。通过动物保护性试验和免疫机理研究结果证实，E.stiedai Asp重组蛋白可以刺激机体产生显著的全身及局部免疫反应，诱导机体产生细胞免疫和体液免疫共同参与抵抗斯氏艾美耳球虫球虫感染，为机体提供一定保护力。本研究在前期鸡球虫DNA疫苗免疫效应与机制深入研究的基础上，完成了兔E.stiedai保护性抗原的高通量筛选与鉴定工作。本研究的开展解决了兔球虫基因工程疫苗研制中的关键问题，为下一步研究抗球虫基因工程疫苗打下基础，将会对兔球虫病的科学防制起到十分重要的作用，为提高我国实验兔质量提供技术保障，同时也为我国养兔业的健康发展开辟新途径。