基于周细胞募集探讨心脑血脉宁促进动脉粥样斑块内新生血管成熟的机制

动脉粥样斑块不稳定乃至斑块破裂诱发血栓形成和急性缺血综合征。斑块内出现周细胞缺如的不成熟新生血管导致斑块不稳定，促新生血管成熟为稳定斑块提供了新视角。内皮细胞经bFGF/PDGF-BB/PDGFR-AB通路介导周细胞募集是实现新生血管成熟的关键。前期工作中发现：益气活血方药心脑血脉宁具促新生血管成熟作用，据此提出心脑血脉宁通过干预上述通路募集周细胞，促新生血管成熟假说。以家兔不稳定斑块模型为研究对象，观察斑块内新生血管成熟及bFGF/PDGF-BB/PDGFR-AB通路变化；进而利用体外血管生成模型及内皮细胞与周细胞共培养模型，观察体外新生血管维持时间及相关因子的表达；采用RNAi技术沉默周细胞的PDGFR-AB，对比沉默前后内皮细胞对周细胞趋化能力的变化，阐明心脑血脉宁干预bFGF/PDGF-BB/PDGFR-AB通路的靶点。揭示心脑血脉宁促新生血管成熟的机制，为临床稳定斑块提供新思路。

动脉粥样斑块不稳定乃至斑块破裂诱发血栓形成和急性缺血综合征。斑块内出现周细胞缺如的不成熟新生血管导致斑块不稳定，促新生血管成熟为稳定斑块提供了新视角。内皮细胞经bFGF/PDGF-BB/PDGFR-AB通路介导周细胞募集是实现新生血管成熟的关键。前期工作中发现：益气活血方药心脑血脉宁具促新生血管成熟作用，本课题在体以球囊拉伤腹主动脉以及高脂饮食复制家兔不稳定斑块模型,首先，分别通过如下方法观察药物是否可以稳定斑块:①计数动脉大体血栓形成数量衡量斑块破裂数目;②通过HE 染色、马宋三色、免疫组化观察斑块形态学的变化；③通过ELISA法观察斑块不稳定相关血清学指标的改变。在确定稳定斑块疗效的基础上，通过免疫荧光和PAS、CD31双染观察斑块内血管数量和血管完整性的改变；通过ELISA和蛋白印迹分别观察血管生成相关因子的改变。在体内发现药效明确的基础上，体外利用血管环再生微血管，观察药物对体外血管新生的维持时间和相关因子的表达;利用transwell装置,共培养周细胞核内皮细胞,观察药物对周细胞向内皮细胞趋化的影响,加入上调因子的抑制剂，对比加入抑制剂前后趋化的改变。结果显示心脑血脉宁可以稳定动脉粥样硬化斑块，降低斑块破裂的比例；改变斑块的形态，减少斑块巨噬细胞的浸润、降低循环中促进斑块破裂因子的表达。心脑血脉宁未能明显减少斑块内新生血管的数量，但能够促进新生血管成熟，主要通过上调PDGF和bFGF 的表达来实现。体外研究发现心脑血脉宁可以促进血管新生，同时可以促进周细胞增生、促进新生血管成熟，延缓血管的蜕变时间。加入上调因子PDGF的抑制剂后，血管维持时间缩短，周细胞数目减少、容易蜕变。揭示心脑血脉宁可以通过抑制炎症、抗氧化、促血管成熟等稳定斑块。心脑血脉宁不抑制斑块内新生血管数量，但可以通过上调PDGF和bFGF达到促进新生血管成熟的目的。揭示心脑血脉宁促新生血管成熟的机制，为临床稳定斑块提供了实验依据。本课题发表学术论文7篇，其中2篇SCI收录，1篇pubmed检索；培养博士研究生2名，参加国内学术会议1次，发表会议论文1篇，另有一篇SCI期刊投稿，处于under review中。