纤维连接蛋白EDA片段调控肝纤维化血管再生的作用研究

Angiogenesis induced by hepatic sinusoidal endothelial cells (HSECs) is an important mechanism of liver fibrosis. We previously found that extra domain A (EDA) of cellular fibronectin (cFN) could induce angiogenesis of HESC, it was also reported that EDA could activate β1 integrin-mediated angiogenesis of tumor cells, however, whether EDA induces β1 integrin-mediated angiogenesis of HSECs in liver fibrosis and its mechanism remain unclear. This project aims to explore the role of EDA -mediated HSEC angiogenesis in liver fibrosis, at first, the relationship between the expressions of EDA, β1 integrin and angiogenesis of liver fibrosis will be analyzed through clinical data, and then primary and cell line of HSECs will be used to study the role of EDA-β1 integrin-mediated angiogenesis of HSECs and identify the key β1 integrin and its cell signaling pathway. Finally, the EDA-/ - mice, Cre-lox Site mice (hepatic sinusoidal endothelial cell β1 integrin-specific deletion) and other animal models will be used to further confirm the EDA-β1 integrin-mediated angiogenesis. This study will contribute to the understanding of angiogenesis mechanism, and provide experimental evidences for therapeutic targets of angiogenesis in liver fibrosis.

肝窦内皮细胞（HSEC）血管再生是肝纤维化发生的重要机制。我们前期研究发现，细胞型纤维连接蛋白（cFN）的外加区EDA片段可诱导HSEC血管再生，另有文献报道，EDA片段可激活β1整合素诱导肿瘤细胞的血管再生，但EDA是否通过β1整合素诱导肝纤维化HSEC血管再生及其机制不清。本研究拟探讨纤维连接蛋白EDA片段调控肝纤维化血管再生的作用，首先通过临床病例研究，分析EDA、β1整合素表达与肝纤维化血管再生的关系；然后利用HSEC原代细胞及细胞系，研究EDA片段通过β1 整合素诱导血管再生中的作用，明确关键的β1 整合素分子及其信号通路；最后采用EDA-/-小鼠、Cre-lox鼠（肝窦内皮细胞β1整合素特异性缺失）等动物模型，进一步验证EDA-β1整合素调控肝纤维化血管再生的作用机制。该研究将为肝纤维化血管再生机制提供新的学说，并为探索抗肝纤维化治疗提供新靶点。

肝纤维化的发生机制主要包括血管再生和肝内纤维结缔组织的异常沉积两个方面。其中，肝内血管再生伴随肝纤维化的整个过程，与肝纤维化的发生、发展密切相关。肝纤维化是一个可逆的过程，阻断血管再生和肝内纤维结缔组织的异常沉积，就可以阻断或逆转肝纤维化。我们前期研究发现，纤维连接蛋白的选择性剪接片段FN-EDA在肝内血管再生中起重要作用。该研究探讨乙肝肝纤维化过程中FN-EDA与肝纤维化及血管再生的关系。应用免疫组化技术检测人肝组织中FN和SMA的表达，评价肝内纤维结缔组织异常沉积的程度；应用免疫组化技术检测人肝组织中VWF和CD34的表达，评价肝内血管再生的程度；应用免疫组化技术检测人肝组织中EDA片段的表达；统计分析人肝组织中纤维连接蛋白的EDA片段与肝纤维化及血管再生程度的关系。研究表明，乙肝肝纤维化组织中FN、FN-EDA和SMA表达与肝纤维化病理分期呈正相关（P<0.05）。乙肝肝纤维化组织中VWF和CD34表达与肝纤维化病理分级呈正相关（P<0.05）。乙肝肝组织中FN-EDA表达与乙肝肝纤维化血管异常增生呈正相关（P<0.05）。