基于Survivin/PI3K/βcatenin通路研究养血解毒方对银屑病血燥证微血管消退机制的影响

Previous studies have shown that blood dryness is one of the basic syndromes of psoriasis, which mainly are plaque psoriasis. Yangxuejiedu decoction was effective to blood dryness syndromes in plaque psoriasis, and VEGF was inhabited. This research is designed to find why and how VEGF and angiogenesis depressed. The psoriasis specimens obtained before and after the treatment through a randomized, double-blind, placebo-controlled trials, which would be treated by Yangxuejiedu decoction, and survivin, PI3K/Akt-β-catenin-Tcf/Lef will be detected. Survivin overexpression and K14/VEGF psoriasis-like transgenic mice raised by Yangxuejiedu decoction, will be used to observe the expression of survivin, PI3K/Akt-β-catenin-Tcf/Lef in different stage. PMA-induced endothelial cells in vitro angiogenesis and to observe the proliferation, migration, micro-lumen formation and signal transduction pathway of survivin, PI3K/Akt-β-catenin-Tcf/Lef, VEGF expression in containing serum and to find how angiogenesis and apoptosis are regulated.

前期研究表明，血燥证是银屑病常见的难治证候之一，临床常表现为斑块型，课题组前期研究表明养血解毒方治疗斑块型银屑病血燥证安全有效，可以通过抑制VEGF而抑制银屑病微血管的增生。本课题拟以survivin如何调控VEGF，诱导微血管消退为切入点，以临床中疗效确切病例的靶皮损组织为主要研究对象，观察养血解毒方治疗前后银屑病患者靶皮损表达survivin以及Survivin/PI3K/βcatenin蛋白的变化；并通过survivin过表达小鼠和K14/VEGF 银屑病样转基因小鼠观察该方对其皮损血管形态及survivin、VEGF下游通路的影响；另以中药含药血清对survivin过表达的内皮细胞增殖、凋亡、细胞周期变化、迁移、管腔形成及通路蛋白的影响，以探明养血解毒方对survivin、VEGF及相关信号通路的影响，揭示其抑制血管新生及促进微血管消退的作用机制，丰富银屑病从“血”论治理论。

背景：银屑病是一种慢性的自身免疫性皮肤病，严重影响患者的生活质量。养血解毒方治疗银屑病疗效确切，然而具体机制不明。既往研究表明银屑病皮损的形成与微血管生成和凋亡的异常关系密切。因此，本研究拟观察养血解毒方对银屑病微血管生成和凋亡的影响、Survivin过表达质粒转染HUVEC细胞和咪喹莫德银屑病小鼠模型的作用机制以及银屑病患者血管生成相关通路蛋白的表达情况，从而探究养血解毒方治疗银屑病的作用机制。..方法：建立咪喹莫特（IMQ）诱导的银屑病的BALB / c小鼠模型，并用养血解毒方进行干预治疗，通过CCK8测定评估细胞活力。通过膜联蛋白V–FITC / PI双重染色和caspase-3检测观察体外实验中细胞的凋亡情况。通过WB, ELISA, 和免疫化学分析检测PI3K/Akt/β- catenin通路蛋白的表达情况。通过留取银屑病患者血液样本，检测患者血管生成相关通路的表达情况。..结果：养血活血解毒方能够改善IMQ诱导小鼠银屑病样皮损部PASI评分，减少微血管数量。养血活血解毒方能够抑制内皮细胞中Survivin、自噬相关蛋白及血管生成蛋白的表达，增强在银屑病中被抑制的LC3II/I的表达。养血解毒方可以抑制在IMQ诱导的银屑病小鼠模型中与PI3K / Akt通路和β-catenin表达相关的蛋白质并减少β-catenin进入细胞核。在Survivin过表达质粒转染的内皮细胞中，我们观察到养血解毒方可以调节Survivin，LC3II / I和p62，VEGF和PI3K / Akt通路相关蛋白的表达以及β-catenin的入核。与健康人相比，银屑病患者microRNA的表达存在差异，且与微血管生成相关的通路如：VEGF信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK和WNT通路等明显上调。..结论：养血解毒方通过调节PI3K / Akt通路抑制Survivin的表达，从而调节微血管的凋亡，自噬和血管生成，从而达到银屑病的治疗作用。养血解毒方为未来银屑病治疗和药物开发提供了研究基础和新的研究方向。