养血活血解毒法对斑块型银屑病血燥证微血管形成的调控机制研究

Previous studies have shown that blood dryness is one of the basic syndromes of psoriasis, which mainly palque psoriasis,nourishing and promoting blood circulation and decoxification were effective to blood dryness syndromes in plaque psoriasis.This research is designed to find the microvascular density and the changes of VEGF and Ang of the target lesions' specimens obtained before and after the treatment through a randomized, double-blind, placebo-controlled trials, which were treated by treating blood theory. The serum of angiogenesis related cytokines changes will be detected by antibody chip technology. K14/VEGF psoriasis-like transgenic mice will be used to observe the microvascular density and the expression of CD105, VEGF / VEGFR, Ras and MAPK impacted by treating blood treatment. PMA-induced endothelial cells in vitro angiogenesis and to observe the proliferation, migration, micro-lumen formation and signal transduction pathway of VEGF / VEGFR Ang / Tie and of Ras, MAPK expression in containing serum. To find nourishing, promoting and detoxifiction method on plaque psoriasis's angiogenesis and pathological aspects of the similarities and differences and the related signaling pathways, revealing the mechanism, enriching the theory of regulating blood in psoriasis.

前期研究表明，血燥证是银屑病常见的证候之一，临床常表现为斑块型，养血活血解毒法治疗斑块型银屑病血燥证安全有效。本课题拟以养血活血解毒法为切入点，以临床中疗效确切的病例的靶皮损组织及外周血液为主要研究对象，观察养血活血解毒方治疗前后银屑病患者靶皮损微血管密度、组织表达VEGF、Ang的变化，利用抗体芯片技术检测血清血管生成相关细胞因子的变化；并引入K14/VEGF银屑病样转基因小鼠观察养血活血解毒法代表方对其皮损微血管密度及表达CD105、VEGF/VEGFR、Ras、MAPK的影响；另以PMA诱导内皮细胞体外模拟血管新生，观察养血活血解毒方含药血清对其增殖、迁移、微管腔形成及信号转导通路VEGF/VEGFR、Ang/Tie及Ras、MAPK表达的影响，以探明养血活血解毒法对血管新生病理环节及相关信号通路的影响，揭示其抑制血管新生及促进微血管消退的作用机制，丰富银屑病从"血"论治理论。

背景：银屑病是一种常见的反复发作，缠绵难愈的慢性炎症性皮肤病，其中的血燥证属难治证候，临床上养血活血解毒法治疗斑块型银屑病血燥证安全有效。方法：本课题以养血活血解毒方为切入点，以临床中血燥证患者的靶皮损组织及外周血液为主要研究对象，以免疫组化染色和抗体芯片技术分别检测血管生成相关细胞因子的变化；观察养血活血解毒法代表方对K14/VEGF转基因小鼠皮损微血管密度及表达CD105、VEGF/VEGFR、Tie2的影响；以PMA诱导内皮细胞体外模拟血管新生，观察养血活血解毒方含药血清对其增殖、迁移、微管腔形成及信号转导通路VEGF/VEGFR、Ang/Tie及Ras、MAPK表达的影响。结果：①临床观察83例斑块型银屑病血燥证患者、发现养血活血解毒方对于斑块型银屑病血燥证有很显著的缓解和治愈作用，能有效缓解瘙痒程度及PASI评分，减少皮损血管内皮细胞标志分子VEGFR的表达。②筛选出了4个与血管生成相关的特异性细胞因子，筛选出54个差异MicroRNA，并预测了相关功能及靶基因。③养血活血解毒方可降低转基因动物耳部血流灌注量，同时可有效降低转基因小鼠耳部皮损血管内皮细胞标志分子CD105的表达，并有效降低转基因小鼠背部皮肤和耳部组织VEGF、VEGFR、Ang2、Tie2及主要通路mRNA基因的表达以及VEGF/VEGFR、Ang/Tie通路蛋白的表达。④养血活血解毒方可以直接作用于体外诱导的血管内皮细胞，有效抑制血管内皮细胞的增殖，抑制血管内皮细胞的迁移，减少管腔形成的数量，从而干预血管的生成环节，其作用的靶点是VEGF/VEGFR及Ang/Tie两条通路。结论：养血活血解毒方对于斑块型银屑病血燥证有很显著的缓解和治愈作用，能有效缓解瘙痒程度及PASI评分，减少皮损血管内皮细胞标志分子VEGFR的表达，可以改善K14/VEGF转基因小鼠皮损并调控其血管生成的信号通路；有效抑制血管内皮细胞的增殖、迁移，减少管腔形成的数量，作用的靶点是VEGF/VEGFR及Ang2/Tie2两条通路。