五聚素3（PTX3）在食管鳞状上皮异型增生至癌变过程中的变化及机制

我国是食管癌高发及死亡率最高的国家。我们既往工作首次发现五聚素3 (pentraxin3，PTX3)与食管鳞癌关系密切，食管鳞癌组织中PTX3蛋白表达阳性率明显低于癌旁组织，且随临床分期增加而逐渐降低。但癌与癌旁组织PTX3表达差异能否代表食管鳞状上皮异型增生至癌变过程中的变化，尚不清楚。本项目①拟采用半定量RT-PCR法和免疫组化的方法，深入研究食管正常鳞状上皮组织-轻度异型增生-中度异型增生-重度异型增生-早期食管癌-侵袭性鳞癌各个病理阶段PTX3基因的表达，明确PTX3基因在食管鳞癌发生发展中的变化，以及运用甲基化特异性PCR方法检测PTX3甲基化状态，以明确PTX3变化是否与甲基化相关；②利用基因转染技术研究PTX3基因在食管鳞癌中所起的作用及其机制，探讨PTX3的高表达是否能够抑制食管鳞癌的发生发展。本项目的完成为食管鳞癌的防治工作提供实验依据，有可能为食管鳞癌的治疗提供新思路。

五聚素3（Pentraxin3，PTX3）属于正五聚蛋白家族，是一个多功能的可溶性模式识别受体。PTX3与多种受体和特定的病原体相互作用，在补体激活、病原体的先天抵抗和调节免疫反应中发挥重要作用，PTX3在肿瘤发生发展中的作用被初步探讨。本研究以人类食管鳞癌细胞系为研究对象，建立稳定转染PTX3的食管鳞癌细胞系，通过观察过表达PTX3对食管鳞癌细胞系的增殖、克隆形成、凋亡、迁移和侵袭以及裸鼠移植瘤形成的影响，探讨PTX3基因在食管鳞癌发病机制中的作用。. 本课题应用Real time RCR的方法检测不同食管鳞癌细胞系和人类永生化食管鳞状上皮细胞中PTX3 mRNA的表达情况。以2株人食管鳞癌细胞系（EC109和KYSE450）作为研究对象，每株细胞系各分为3组：空白对照组（Control 组）,阴性对照组（Vector组）和实验组（PTX3组）。采用稳定转染的方法，使PTX3在EC109和KYSE450细胞中过表达，应用G418筛选的方法来构建PTX3过表达的食管鳞细胞系，通过Western Blot的方法检测稳定转染PTX3的效果。应用细胞活性实验 （MTT）， 平板克隆形成实验，流式细胞术检测PTX3过表达对各组食管鳞癌细胞的增殖、平板克隆形成能力、凋亡的影响。应用改良的Boyden小室的体外肿瘤细胞趋化实验和重组基底膜侵袭实验研究过表达PTX3对各组食管鳞癌细胞的迁移和侵袭的影响。并完成裸鼠的致瘤性实验，建立裸鼠移植瘤模型，检测PTX3在活体内对肿瘤生长的作用。. 研究发现：1. 食管鳞癌细胞系中PTX3 mRNA的表达均低于人类永生化食管上皮细胞。2. 过表达PTX3可以抑制食管鳞癌细胞的增殖，减弱细胞的克隆形成能力，诱导细胞凋亡的发生，但对细胞的迁移和侵袭活性并无影响。3. 过表达PTX3可以抑制食管鳞癌细胞裸鼠移植瘤的肿瘤生长。. 本课题研究目前已发表SCI论文一篇，并培养1名博士研究生。