人原代肝细胞和HepG2细胞的杂交细胞感染HBV的研究

由于缺乏理想的HBV体外感染模型，人们对HBV的生命过程的认识尚不完全。如果仅从动物嗜肝病毒DHBV、WHV、GSHV的研究信息去推定人的HBV，则存在一定差别。用HBV基因转染的方法去研究HBV感染细胞的入胞过程（吸附、入胞、核内移）和HBV复制期间自然的生物反馈调节有一定缺陷。HBV基因转染不同于HBV自然感染，它是在外源性强启动子的控制下或靠与宿主细胞DNA整合进行强制性地转录和复制。本课题组在前期研究的基础上，利用人原代肝细胞支持HBV自然感染的特性和HepG2可体外连续传代的优势，通过细胞融合杂交，产生具有两者综合特点的杂交细胞，既有HepG2细胞体外传代特性，又有人原代肝细胞对HBV易感特性。选取HBV易感的杂交细胞株，研究HBV感染入胞过程和其在杂交细胞内的感染状态（游离或整合）及其子代HBV的感染能力，将对于揭示HBV的自然生命过程及深入研究抗HBV的新方法具有重要意义。

研究背景：由于缺乏理想的HBV体外感染模型，人们对HBV的生命过程的认识尚不完全。如果仅从动物嗜肝病毒DHBV、WHV、GSHV的研究信息去推定人的HBV，则存在一定差别。用HBV基因转染的方法去研究HBV感染细胞的入胞过程（吸附、入胞、核内移）和HBV复制期间自然的生物反馈调节有一定缺陷。HBV基因转染不同于HBV自然感染，它是在外源性强启动子的控制下或靠与宿主细胞DNA整合进行强制性地转录和复制。.研究方向和主要内容：本课题组在前期研究的基础上，利用人原代肝细胞支持HBV自然感染的特性和HepG2可体外连续传代的优势，通过细胞融合杂交，产生具有两者综合特点的杂交细胞，既有HepG2细胞体外传代特性，又有人原代肝细胞对HBV易感特性。.研究方法和过程参见报告正文。.重要结果：本课题组成功地建立了人原代肝细胞与HepG2细胞的杂交细胞。利用人原代肝细胞支持HBV自然感染的特性和HepG2可体外连续传代的优势，通过细胞融合杂交，产生具有两者综合特点的杂交细胞。该杂交细胞既有HepG2细胞体外传代特性，又有人原代肝细胞对HBV易感特性。对杂交细胞克隆与其生物学特性进行了研究。证明了该杂交细胞是人原代肝细胞与HGPRT-HepG2细胞的杂合体。并对HBV感染杂交细胞早期过程中二甲基亚砜（DMSO）地塞米松的影响进行了研究，发现DMSO、地塞米松有促进HBV自然感染的能力。对HBV感染杂交细胞早期过程进行研究发现：HBV吸附实验结果显示杂交细胞与亲代细胞HepG2没有差别，但HBV感染后杂交细胞上清液能够检出HBsAg、HBcAg和HBeAg，而对照细胞HepG2的培养上清液在HBV感染后没有检测到上述HBV标志物。在对已感染HBV的杂交细胞中HBV的复制、感染状态和感染性研究发现：该杂交细胞可以感染HBV，并在上清液和细胞内检测到HBV cccDNA。杂交细胞感染HBV 5天后上清液离心浓缩后电镜检测可发现Dane颗粒。杂交细胞感染HBV 5天后Southern印迹检测到HBVcccDNA。