慢性乙型肝炎患者血清HBV RNA的来源及分泌释放机制研究

Recent studies report that the serum HBV RNA levels of chronic hepatitis B patients(CHB) can predict response results to antiviral therapy. But the existing HBV life cycle cannot explain the sources of HBV RNA and its secretion or release. For the mature virus of HBV from infected liver cells are HBV DNA containing particles which with infectious. So, where these HBV RNA come from? From damaged liver cells, virus particles or other release pathway? To answer this question, we have developed detection system which can distinguish particle or particle-free HBV RNA by using transiently transfected cells and immunoprecipitation method. This project intends to use the method to detect HBV RNA in serum of CHB patients, and to investigate the key factor of HBV RNA release. This project will complement the current understanding of HBV life cycle and provide theoretical evidence for clinical application of HBV RNA.

新近的研究表明慢乙肝患者血清的HBV RNA水平能够有效预测患者抗病毒治疗应答的结局。但是现有的HBV复制周期无法说明HBV RNA的来源及其分泌或者释放的途径。由于HBV感染的肝细胞释放出的成熟病毒颗粒是只包含HBV DNA的可感染性颗粒。那么，乙肝患者血清中的HBV RNA究竟是来源于破损肝细胞、病毒颗粒还是其他分泌释放途径？为探索这一问题，我们在预实验中利用体外瞬时转染的肝细胞株培养上清，通过免疫沉淀病毒颗粒的方法，建立了区分病毒颗粒和非病毒颗粒来源的HBV RNA的方法体系。本项目拟进一步采用该方法对存在于患者循环系统中的HBV RNA进行区分和检测，并探讨其分泌释放过程中的关键环节。本项目将为补充完善目前对HBV复制周期的认识，为HBV RNA作为诊疗指标应用于临床提供理论依据。

血清HBV DNA是目前监测慢性乙型肝炎患者疾病进展的重要指标之一。近年来，血清HBV RNA逐渐成为HBV慢性感染新型生物标志物研究的热点之一。学者们发现血清HBV RNA有望成为肝组织内cccDNA的重要替代指标，并且与慢性乙型肝炎抗病毒治疗应答和停药后疾病复发相关。但是有关血清HBV RNA的种类，其相应的检测方法，和不同种类在临床应用中的价值一直未有定论。本研究建立了四种检测不同种类HBV RNA的方法，对这些方法在预测慢乙肝患者治疗应答和停药复发方面的价值进行了评估。本研究结果发现血清中的HBV RNA主要是pgRNA，在预测治疗应答方面，不同的方法均具有较好的预测效能，在预测停药复发方面，靶向5’端的方法具有最好的效能，若联合靶向S区的方法采用双阴性结果进行预测也具有较好的效能。同时，我们创新性的应用血清HBV RNA中的耐药变异位点，通过跟踪患者发生耐药的整个过程推算出cccDNA的置换周期在6个月内。这些结果为阐明血清HBV RNA的种类，其临床应用场景和新药研发均提供了有意义的理论依据。本研究筛选出的靶向5’端的检测方法有望进一步进入临床转化，成为较优选的血清HBV RNA定量检测方法。