云南宣威肺腺癌干细胞生物学特性研究

肿瘤干细胞的存在是肿瘤发生发展、转移、治疗抵抗和复发的重要原因。云南宣威肺癌以女性高发为特征，其死亡率居全球首位。本课题组的前期工作已从云南宣威肺癌细胞系中克隆到一具有高度恶性生物学行为的细胞群，并具有肺腺癌干细胞样特征和动物致瘤性。本项目拟在此基础上，围绕肿瘤干细胞共性和肺腺癌干细胞个性涉及到的与细胞自我更新、增殖和分化相关的生物大分子，以及LIF与Wnt信号调节通路、miRNA表达谱等方面，采用Realtime RT-PCR、流式细胞术或免疫荧光、miRNA芯片等方法，从细胞生物学和干细胞样特性、裸鼠成瘤能力等方面对该群细胞进行全方位鉴定，旨在明确它们是否肺腺癌干细胞样细胞群，并初步探索其相关调节机制，为了解云南宣威肺癌的发病机理奠定基础。其成果不但对肿瘤干细胞的研究有较高的学术价值，而且对制定新的云南高发肺癌诊治策略、开发新的治疗靶标，提高本地高发肺癌患者5年生存率具有重要意义。

肿瘤干细胞是肿瘤发生、转移、治疗失败和复发的重要原因。云南宣威肺癌以女性高发为特征。前期项目组从新建的宣威肺腺癌细胞系中克隆到一高度恶性生物学行为的细胞群，具有肺腺癌干细胞样特征与致瘤性。.本项目通过克隆化培养及成瘤后在裸小鼠体内连续传代两条途径，保持XLA-07/SPs肺腺癌干细胞样细胞群的稳定性；通过一般生物学性状、对化疗药敏感性、异种动物接种致瘤性和肺腺癌干细胞样特性4个方面的研究，对该细胞群的生物学特性进行鉴定；探讨XLA-07/SPs细胞群“干性”维持的可能机制，重点是Wnt/β-catenin与LIF-LIFR/gp130-Jak-Stat3信号通路和miRNA表达谱的情况。.经过研究，我们体外克隆到2个XLA-07/SPs亚群（C11，E8），具有恶性上皮细胞生物学特征，部分表达干细胞相关基因及蛋白分子ABCG2、hTERT、SFTPC、SCGB1A1、IGF-IR，未见BrdU潴留和ALDH表达； C11的恶性程度高于E8，且可对NOD/SCID鼠致瘤。无血清培养条件下2个细胞亚群均较好地保留了部分干细胞表型和分子特性，尤其是共表达支气管肺泡干细胞分子标记SCGB1A1与SFTPC，能向细胞外分泌较高浓度的IL-6。原代培养成瘤组织后继续克隆，得到一恶性程度更高的细胞亚系D2，对临床常用的化疗药多西他赛、培美曲赛、顺铂、紫杉醇均耐药。Wnt信号通路的多数主要蛋白分子均有表达和激活，miRNA表达谱亦有明显差异，提示二者在干性维持方面具有重要作用。.结果表明，我们成功分离到富含云南宣威肺腺癌干细胞样细胞系，类似小鼠支气管肺泡干细胞BASC，共表达SCGB1A1(CCSP)与proSP-C，高表达ABCG2、hTERT、Sox2，低表达Bmi-1 、CD90，未见SSEA-3/4、Oct3/4、Nanog、c-kit（CD117）、HLA-DR、CD34、CD45、CD24等表达，未发现有醛脱氢酶活性；初步明确Wnt/β-catenin信号通路在维持该特殊细胞系的干细胞特性方面发挥了主要作用，miRNA的差异倍数可达上百倍，提示其也参与了干性的维持；另外，建立了云南宣威肺腺癌的体内与体外模型。这些结果对深入研究宣威肺腺癌的发病机理、开发新的治疗靶标具有重要意义。