高性能壳聚糖纳米微囊介导免疫毒素对人脑胶质母细胞瘤血管及其“拟态血管”的双重靶向杀伤研究

本研究是在我们前期初步获得绿脓杆菌外毒素(Pseudomonas extoxin, PE)毒素蛋白分子的基础上，选择壳聚糖为载体材料，通过离子交联法或聚合法等制备PE类毒素纳米微粒，并研究其理化特征，然后通过结合靶向性的VEGF片段和EphrinA-1片段，分别形成高性能壳聚糖纳米微囊介导靶向性的 EphrinA-1－PE纳米微粒和VEGF－PE 纳米微粒，经口服和血液途径，观察其对人脑胶质母细胞瘤血管及其拟态血管的双重靶向杀伤研究，探索更彻底的脑胶质母细胞瘤的抗血管生成治疗策略，并试图尽量解决免疫毒素应用的非特异性毒性的瓶颈问题，使其在高于最大耐受剂量maximally tolerated dose (MTD)时仍能较好地耐受，进而探讨其作用机制；同时为纳米微粒免疫毒素在抗肿瘤血管领域的应用奠定基础。

首先通过基因克隆获得VEGF165基因片段；经酶切获得PE38基因片段；通过相应的定向克隆与连接，构建了VEGF165引导的PE类真核表达载体pIRES2-VEGF-PE38-EGFP，通过体外研究表明其对体外血管具有杀伤作用，通过裸鼠移植性脑恶性胶质瘤动物模型体内实验研究，其抑制裸鼠移植性人脑恶性胶质瘤新生血管生成，有效降低肿瘤组织中的微血管密度，对移植性人脑恶性胶质瘤的生长有明显的抑制作用；在此基础上构建了Ephrin A1-PE38融合基因并将其转染hMSC后对胶质瘤的靶向性杀伤的体外及裸鼠体内研究，初步表明胶质瘤拟态血管具有杀伤作用；在此基础上，制备了PE38- VEGF 和PE38- Ephrin A1 纳米微囊，其特异细胞毒性作用与抗血管生成作用实验结果目前正在整理之中。