基于“惊风三发便为痫”理论探讨加味银翘散调控HMGB1防治癫痫发生的免疫调节机制研究

The prevention and control strategies of epilepsy have shifted from controlling seizures to preventing and treating epileptogenesis. The epileptic phase is the germination stage of epilepsy, and the neuronal damage and secondary immune homeostasis are the basic mechanisms. The pro-inflammatory factor HMGB1 is the link between the two and is the triggering factor for inducing immune damage..In our previous studies, we found that adding Yinqiaosan not only reduce the number of seizures and respiratory infections, but also reduce the severity of seizures and delay the progression of epilepsy, which may be related to the regulation of immune inflammation. According to this hypothesis, adding Yinqiaosan can not only regulate peripheral immune disorders, but also regulate the imbalance of brain immune homeostasis. It can reduce the excessive immune response after neuronal injury and prevent brain immune homeostasis by inhibiting the excessive release of HMGB1, prevention and treatment of childhood epileptogenesis.. This project takes HMGB1 as the core index, and uses adding Yinqiaosan as an intervention method to induce SE model with lithium chloride-pilocarpine, divided into normal group, model group, western medicine group and traditional Chinese medicine group, using Nissl staining and FJB Staining, immunohistochemistry and immunofluorescence double labeling, etc to observe the release, expression and distribution of HMGB1 in the brain at different time points (1 week, 2 weeks, 4 weeks). Preliminary clarification of the immunomodulatory mechanism of adding Yinqiaosan on epileptogenesis.

癫痫的防控策略已由控制发作向防治癫痫发生转移。癫痫发生期是癫痫的萌芽阶段，神经元损伤和继发免疫稳态失衡是其基本机制。促炎因子HMGB1是衔接二者的纽带，是诱导免疫损伤的启动因子。我们在前期研究发现加味银翘散不仅能减少癫痫合并呼吸道感染的次数，还能减轻癫痫发作和延缓癫痫发生的进程，可能与调节免疫炎症相关。据此提出假说“加味银翘散不仅能调节外周性免疫紊乱，也能调节脑免疫稳态失衡。它通过抑制HMGB1的过度释放，减轻神经元损伤后的过度免疫反应，维护脑免疫稳态，防治儿童癫痫发生”。本项目以HMGB1为核心指标，以加味银翘散为干预手段，以氯化锂-匹罗卡品诱导SE模型，分为正常组、模型组、西药组、中药组，运用尼氏染色和FJB染色、免疫组化法、免疫荧光双标法等在癫痫发生期不同时间点（1周、2周、4周）观察HMGB1在脑内释放、表达、分布的变化。初步阐明加味银翘散对癫痫发生的免疫调节机制。

防治关口前移是癫痫诊疗理念的重大转变，其重心开始由控制癫痫发作向抑制癫痫发生转移，癫痫发生是癫痫的萌芽阶段和“窗口期”。前期临床研究发现加味银翘散不仅能减少儿童癫痫合并呼吸道感染的次数，还有部分抗癫痫发生的作用，考虑与其免疫调节相关，可能是通过有效调节晚期炎症因子HMGB1在脑内表达、释放有关。本项目以HMGB1为核心指标，复制氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型，以加味银翘散为干预手段，分为空白组、模型组、银翘散组和左乙拉西坦组，在造模后的3个不同时间点（7天、14天、28天），从行为学、病理染色、免疫组化、免疫荧光、免疫蛋白印迹及RT-PCR等角度观察和比较加味银翘散对HMGB1及其信号通路的影响。同时在此基础上开展了部分加味银翘散核心药物物质基础研究。研究结果显示：（1）通过对加味银翘散核心药物“荆芥、石菖蒲”的质谱和指纹图谱分析，初步推断具有“辛”味药性的中药可能为入脑关键药物，其挥发性有机化合物（VOCs）为入脑主要成分；（2）加味银翘散能有效降低癫痫大鼠惊厥次数和持续时间；减轻脑充血和脑水肿，降低癫痫大鼠的死亡率；减轻海马不同区域神经元坏死及凋亡，提示加味银翘散有抗惊厥和神经保护效应；（3）加味银翘散能有效抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的增殖和活化，能抑制HMGB1在神经元和胶质细胞内的转胞，并呈时间效应性，提示加味银翘散具有抗炎作用；（4）通过定位和定量发现加味银翘散在第1周促进HMGB1的表达，第2周、第4周抑制HMGB1的表达，胞内和胞外具有差异性；在调节HMGB1/TLR4/NMDAR2B通路的同时，加味银翘散可能还调节其他炎症因子及通信号路发挥免疫调节作用。综上，加味银翘散能有效调节HMGB1在脑内的转胞、释放、共分布而发挥免疫调节作用，通过神经保护和抗炎的双重功效而发挥抑制癫痫发生作用。