促红细胞生成素调控大鼠血睾屏障的形成在肾主生殖实质研究中的作用和机制

Chinese kidney-tonifying drugs upregulated hypothalamic-pituitary-gonadal axis level, promote spermatogenesis, has outstanding effects. But the essence of kidney dominating reproduction is not clear. Erythropoietin (EPO)screted from kidney maybe the original molecule, because it can prevent germ cell apoptosis. The normal function of blood-testis barrier is a key role to control spermatogenesis. In our previous study,the sertoli cell differeniate and dedifferentiate play an important role in blood-testis barrier forming. Semen Cuscutae Flavonoids promote sertoli cell differentiating and maturing to keep normal function of blood-testis barrier. So we propose our hypothesis is that EPO protect spermatogenesis through promoting sertoli cell differentiated and blood-testis barrier forming. To testify this hypothesis, we will be from three level(whole testis, Seminiferous Tubules and sertoli cell), forward direction (EPO) and backward direction(Wuziyanzong pill and monomer Lycium barbarum Polysaccharide, Semen Cuscutae Flavonoids) observe the effect of EPO expression increase or decrease on sertoli cell differentiating, blood-testis barrier forming and downstream signal transduction after heat treatment on rats. The task will clarify molecule essence of kidney dominating reproduction, make visceral picture theory deeper, and provide a new target for infertility men.

补肾中药上调下丘脑-腺垂体-性腺轴水平，促进精子发生，临床疗效卓著。但肾主生殖的分子实质尚未阐明。肾脏分泌的促红细胞生成素（EPO）能保护生精细胞，避免生精细胞凋亡。因此EPO可能是肾主生殖的源头分子。睾丸血睾屏障的形成与完整控制着生精细胞的分化与成熟。前期研究中我们发现，支持细胞的分化是血睾屏障形成的关键因素，而菟丝子黄酮能促进支持细胞分化，形成血睾屏障。据此我们推测EPO能促进睾丸支持细胞分化，维持血睾屏障完整，进而调控生精过程，提高生殖功能。为验证这一假说，我们将复制大鼠睾丸热处理模型，从整体-曲细精管-细胞三个层次，从正向（EPO）和反向（补肾药物复方五子衍宗丸和单体菟丝子黄酮、枸杞多糖）两个角度，观察EPO正常表达，表达增加或减少对睾丸支持细胞分化，血睾屏障形成的影响及其下游信号转导通路。本课题将从新视角阐明肾主生殖的分子物质基础，深化中医藏象理论，并为男性不育的防治提供新靶点。

多种原因导致男性不育，其中睾丸局部高温可通过影响支持细胞的正常功能而是致生精障碍。五子衍宗丸作为治疗肾精亏虚型男性不育的经典方，临床应用及动物实验卓有成效，但五子衍宗丸对睾丸支持细胞的作用尚不明确，本项目通过研究五子衍宗丸及枸杞多糖、菟丝子黄酮对热激后睾丸支持细胞的保护作用揭示五子衍宗丸促进生殖功能的上游分子机制。.在该项目中，我们研究了①五子衍宗丸复方、菟丝子黄酮和枸杞多糖对幼年大鼠睾丸发育的作用和机制。②五子衍宗丸复方、菟丝子黄酮和枸杞多糖灌胃对成年大鼠睾丸热激后的抵抗作用和机制。③五子衍宗丸复方、菟丝子黄酮和枸杞多糖对20天龄小鼠睾丸支持细胞的作用和机制。④五子衍宗丸复方、菟丝子黄酮和枸杞多糖对成年大鼠支持细胞睾丸热激后的抵抗作用和机制。⑤ 通过全基因表达谱芯片检测结果分析五子衍宗丸、菟丝子黄酮和枸杞多糖对睾丸支持细胞的保护作用。证实了①五子衍宗丸，单体菟丝子黄酮和枸杞多糖通过促进大鼠睾丸发育过程中支持细胞的成熟和血睾屏障形成，促进生精细胞成熟。②五子衍宗丸，单体菟丝子黄酮和枸杞多糖能抵抗和干预大鼠睾丸热处理造成的支持细胞去分化，血睾屏障损伤，从而避免生精细胞凋亡。在该过程中，EPO及其受体，AR在维持支持细胞正常功能的上游发挥重要作用。本项目从促进正常生殖发育，和治疗生殖疾病两个角度进行五子衍宗丸的机制研究，揭示肾主生殖理论的源头和下游关键调控分子，为深化肾主生殖的藏象理论提供新思路。.