基于哺乳动物细胞表面展示技术筛选抗TNF-α的人全长单克隆抗体

当前，单克隆抗体药物在全球范围内广泛应用。以噬菌体展示技术为代表的抗体展示及筛选技术可用于研发单克隆抗体。但噬菌体是原核生物，无真核生物的翻译后修饰机制，且仅可展示小分子抗体(如Fab、scFv)。经噬菌体展示技术筛选到的小分子抗体需转换为全长抗体，再导入哺乳动物细胞进行生产并纯化，进入后续的研究及临床使用；但此过程费时费力、成功率低。因此，需要一种能够直接筛选全长抗体的技术。尽管哺乳动物细胞表面展示技术能筛选全长抗体，但抗体库的库容量不足以满足高特异性抗体的筛选需要。因此，本项目拟通过应用一组特殊的限制性内切酶、利用哺乳动物细胞内在的抗体表达机制等策略，构建以类风湿关节炎患者外周血为来源的大容量全长抗体库；随后将抗体库展示在哺乳动物细胞表面并结合流式细胞分选术筛选抗TNF-α的人全长单克隆抗体，以建立并优化全长抗体的哺乳动物细胞表面展示及筛选技术平台，为新的抗体制剂的研发打下基础。

本项目的研究计划的要点是应用国际领先的全长抗体哺乳动物细胞表面展示技术平台，构建自身免疫疾病患者来源的大容量全长抗体库，并在其中筛选获得特异性抗体，以期用于治疗类风湿关节炎等自身免疫疾病。现该项目基本按计划进行，已构建完成大容量全长抗体基因库，并将全长抗体展示在哺乳动物细胞表面，后续的抗体筛选工作正在进行。.按原实验计划，应将展示在293T细胞表面的大容量全长抗体库进行分选、富集，获得次级抗体基因库，随后将抗体基因库稳定展示在FCHO细胞表面。但由于每一个单克隆293T细胞表面均可表达多种不同的抗体的多个拷贝，不同抗体之间的空间构型可能相互影响；且筛选获得的阳性细胞中也包含有多种抗体基因。因此，筛选富集效率难以提高。考虑到本实验所选取的外周血来自于自身免疫病患者，此时免疫状态活跃，抗体表达水平较高。因此，直接从轻链库中克隆出抗体轻链基因、从重链库中克隆出抗体重链基因，同时插入表达载体pDGB4，构建了大容量全长抗体次级抗体库，以利于后续抗体筛选工作的完成。.本项目负责人于2013年12月出国留学深造，用于本研究的时间精力受限，部分地影响了相关研究工作进展。我们正在努力克服这些障碍，继续推进实验进展。项目负责人将于近期学成回国，并尽快完成后续实验研究。