构建“成分-效应-靶点”网络体系探讨岭南特色饮片制枳壳“存效减燥”的炮制机理

Processed Aurantii Fructus is a kind of medicine with Lingnan characteristics processing methods obtained by fermentation and distillation, and it is widely used in clinic. It can reduce the “zaoxing” of crude Aurantii Fructus，but the mechanism of “ preserving the efficacy and reducing zaoxing " is unknown. This study will establish functional dyspepsia rat model, construct the biological characterization system of the pharmacodynamic effect of Aurantii Fructus, through the impact on gastrointestinal motility, visceral hypersensitivity and secretion of brain-gut peptides, such as MTL, GAS, SS, VIP in experimental animals. Meanwhile, the biological characterization system of the “zaoxing” of Aurantii Fructus also be constructed by the impact of water metabolism and energy metabolism. Using two systems to screen active ingredients, obtain the active components group of "effect" and "zaoxing" in Aurantii Fructus by the method of chemical composition analysis. It is possible to preliminarily explore the material basis of processed Aurantii Fructus. Using the method of network pharmacology, establish the component-effect- target network model of processed Aurantii Fructus, select one or two pathways in the top rank, and verify through cell or animal experiments, to explain the possible mechanism of processed Aurantii Fructus. To isolate and identify the Fungi in processed Aurantii Fructus, establish a simulated fermentation system, and discuss the transformation and change of active ingredients in the process of fermentation and steaming, to explore the mechanism of chemical change in processing.

制枳壳为岭南特色炮制饮片，临床应用广泛，经发酵后蒸制而得，可缓和生枳壳燥性，但其“存效减燥”的炮制机理不明。课题建立功能性消化不良大鼠模型，从对胃肠动力；内脏敏感性及MTL、GAS、SS、VIP等脑肠肽分泌的影响几方面，构建枳壳宽中行滞“药效”的生物学表征体系。从对水代谢、能量代谢的影响两个方面，构建生枳壳“燥性”的生物学表征体系，利用这两个体系对生、制枳壳不同极性部位（或组分）进行活性筛选，通过成分分析，获得具有“存效”与“减燥”作用的制枳壳活性成分群，初步探明制枳壳作用的物质基础。利用网络药理学研究方法，建立制枳壳“存效减燥”作用的成分-效应-靶点网络模型，通过靶标功能和通路分析，选择排名前列的1-2个通路，利用细胞或动物实验进行验证，阐释制枳壳“存效减燥”可能的作用机理。对枳壳发酵的菌种进行分离与鉴定，建立模拟发酵体系，研究活性成分在发酵与蒸制过程中的转化，探讨炮制过程中的化学机理。

制枳壳为岭南特色炮制饮片，临床应用广泛，经发酵后蒸制而得，可缓和生枳壳燥性，但其 “存效减燥”的炮制机理不明。课题研究中分别以正常动物、不规则饮食复合夹尾刺激法功能性消化不良大鼠模型（FD）以及慢性温和不可预知应激抑郁样功能性消化不良小鼠模型（CUMS）为研究对象，分别建立了枳壳的“药效”与“燥性”的生物学表征体系，发现生、制枳壳均能改善模型动物的胃肠功能与抑郁样行为，在绝大多数药效指标上，生、制枳壳无明显差异。制枳壳经岭南特色炮制后，具有“存效”的特点。但在促小肠推动、减少CUMS小鼠海马神经元损伤等作用上，制枳壳优于生枳壳，具有一定的“增效”作用。另外，二者在调节胃肠激素、单胺类神经递质分泌上也有所差别。说明生、制枳壳的理气解郁、行滞消胀的作用机制有所差别。生枳壳可引起大鼠饮水量升高、唾液分泌量降低、颌下腺AQP5、VIP和5-HT含量降低。这些指标可作为枳壳燥性的生物学效应表征。制枳壳可以缓和生枳壳的燥性。通过构建枳壳“成分-效应-靶点”网络模型，基于SCF/c-kit信号通路探讨了制枳壳行滞消胀药效的作用机制；发现核黄素代谢、嘌呤代谢、视黄醇代谢等代谢通路是与制枳壳缓燥作用密切相关的重要通路。确定制枳壳炮制过程中黄酮苷类成分的转化，是其发挥“存效缓燥”作用的主要物质基础。枳壳经岭南特色炮制工艺发酵蒸制后，黄酮双糖苷的含量均有不同程度的下降，而橙皮素-7-O-葡萄糖苷、柚皮素-7-O-葡萄糖苷、柚皮素、橙皮素等单糖苷及苷元的含量大幅度增加。发酵是枳壳岭南特色炮制工艺的关键环节，以黑曲霉为代表的曲霉属真菌是枳壳发酵的关键微生物，在这些微生物分泌的柚皮苷酶、橙皮苷酶的作用下，枳壳中的黄酮苷类成分转化为单糖苷及苷元。通过筛选优势菌株，优化发酵温度、发酵湿度、发酵时间等工艺参数，分别建立了枳壳自然发酵与定向发酵的规范化工艺。通过研究初步探明了制枳壳的作用机制与炮制机理，可指导规范化的炮制生产，挖掘地方炮制特色，传承保护特色炮制工艺。