双靶区反义RNA抗乙肝病毒的实验研究

本研究系人工合成HBVP，X基因片段，分别构建表达P区X区单靶位及双靶位反义RNA逆转录病毒载体，并构建双靶区正义RNA逆转录病毒载体为对照，转染Crip包装细胞，G418筛选阳性细胞克隆获其假病毒颗粒，用其分别感染2.2.15细胞HBsAg，HBeAg及对HBVDNA的抑制作用，结果发现感染后第3天，细胞上清HBsAg和HBeAg表达受到抑制，第5天达到高峰，持续到第9天。单靶区X及单靶区P区反义RNA对HBSAg和HBeAg的抑制率分别为45%，53%及59%，57%，双靶区XP区反义RNA抑制率更高，分别为82%和87%。用FQ-PCR方法测定2.2.15细胞培养上清HBVDNA，细胞内BHVDN及HBVmRNA，亦有明显抑制作用，以双靶区反义RNA抑制作用最强，且无明显的细胞毒作用，正义RNA均无明显抑制作用，为抗HBV多基因区，变异病毒及多重病毒感染治疗打下基础。