唇裂动物模型的建立及伪受体BAMBI在唇裂发生中的作用

应用模式动物是研究疾病发生的重要方法。自1965年发现应用糖皮质激素诱发小鼠腭裂动物模型后，利用该模型对腭裂发生的机理进行了较深入的研究，但迄今仍未能成功建立唇裂动物模型，对唇裂发生机理所知较少。我们在最近的研究中偶然将柠檬醛（CT）导入鸡胚右侧鼻凹的间充质，继续孵化后诱发了唇裂畸形。因此,本研究拟将CT导入鸡胚鼻凹组织中，建立具有胚胎发育真实环境并可继续生长发育的稳定鸡胚唇裂动物模型；应用组织切片、免疫组化、原位杂交和末端标记等技术研究柠檬醛对鸡胚唇发育关键调控基因BAMBI及其相关信号时空表达的影响；并以此唇裂模型为基础，通过微珠载体将BAMBI、RA、Fgf8等实验因素导入鸡胚唇裂模型中，应用组织学等技术观察其对唇部发育和唇裂发生的影响，阐明伪受体BAMBI信号在唇裂发生中的作用，促进人们对唇发育和唇裂发生机理的深入理解，为探索早期发现和防治唇裂的方法提供新的思路和科学依据。

先天性唇腭裂是人类口腔颌面部最常见的发育畸形，在我国其发病率高达1.3-3.1‰ 。应用携带有柠檬醛(0.6g/ml)的载体微珠植入正常发育的20期鸡胚右侧鼻窝外胚层上局部诱发畸形，建立可继续生长发育的鸡胚唇裂动物模型,为进一步研究唇发育和唇裂畸形的发生提供了较好的实验材料。应用免疫组化、原位杂交和末端标记等技术研究与唇发育和唇裂发生密切相关的BAMBI等基因的表达和细胞凋亡的变化，BAMBI在鸡胚的额鼻突、侧鼻突、上颌突、下颌突、脑、眼周均有表达。随着鸡胚孵化时间的延长，DMSO组和空白组BAMBI的表达逐渐增加，差异无统计学意义（P﹥0.05）。各时间柠檬醛实验组BAMBI的表达均低于同时间DMSO组和空白组，差异有统计学意义（P﹤0.05），且BAMBI表达增加的趋势较DMSO组和空白组明显降低。表明柠檬醛可抑制鸡胚唇部组织BAMBI的表达，BAMBI表达增加的趋势明显降低，影响鸡胚唇部的发育，提示BAMBI在唇部发育和唇缺损畸形发生过程中具有重要作用。柠檬醛组各时段表达均明显低于空白组和DMSO组，差异有统计学意义（P＜0.05）。RARβ在鸡胚上颌突与侧鼻突中表达，空白组和DMSO组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；柠檬醛组各时段表达均明显低于空白组和DMSO组，差异有统计学意义（P＜0.05）。免疫组织化学法检测发现，FGF8在鸡胚眼、脑和鼻窝的外胚层表达，随时间发展表达呈上升趋势，空白组和DMSO组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。柠檬醛组各时段表达均明显低于空白组和DMSO组，差异有统计学意义（P＜0.05）。柠檬醛可导致RARβ与FGF8表达下调，影响鸡胚唇部发育。外源性BAMBI、RA和FGF8可以有效的降低柠檬醛对唇部组织发育的影响，减低其诱发唇裂畸形。这为寻找与唇腭部发育和唇腭裂发生密切相关的生物分子，以便能在妊娠早期通过检测或干预这些生物分子功能，达到早期发现及防治的目的提供了新的思路。