TRAIL调控P-gp介导的激素抵抗在ITP中的作用和机制研究

Corticosteroids (CS) are the recommended first-line management for immune thrombocytopenia (ITP), though proportions of patients are resistant to CS and fail to respond. Our previous studies suggest that overexpression of P-gp reduces the intake of CS by peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and leads to CS-resistance. However, the upstream regulation mechanism has not been identified. TRAIL may lower the expression of P-gp via suppression of DNA-PKcs/Akt/GSK-3β pathway. Studies show down-regulation of TRAIL in ITP, while our preliminary tests describe an up-regulation of DNA-PKcs as well as phosphorylation of Akt and GSK-3β. We speculate that the CS-resistance mediated by P-gp in ITP may result from impaired suppression of DNA-PKcs/Akt/GSK-3β pathway due to the down-regulation of TRAIL. Exogenous TRAIL intervention is expected to enhance the suppression of the pathway and thereby reverse the CS-resistance. By use of cell culture and active ITP mouse model, the current study aims at demonstrating the role and mechanism that TRAIL regulating P-gp-mediated CS-resistance in ITP, and evaluating the therapeutic potential of TRAIL intervention.

糖皮质激素是ITP的首选治疗，但部分患者存在激素抵抗，对治疗反应不佳。我们发现激素疗效不佳的ITP患者PBMC细胞P-gp表达上调，通过减少细胞对激素的摄取介导激素抵抗的发生，但其上游调控机制尚不清楚。TRAIL可以通过抑制DNA-PKcs/Akt/GSK-3β通路降低P-gp表达，有研究显示ITP患者TRAIL表达减少，我们在预实验中也发现P-gp高表达的ITP患者存在DNA-PKcs上调以及Akt、GSK-3β磷酸化。因此我们推测ITP患者P-gp介导的激素抵抗可能和TRAIL低表达对DNA-PKcs/Akt/GSK-3β通路的抑制作用减弱有关，外源性TRAIL干预有可能恢复对该通路的抑制，逆转激素抵抗。本课题将通过体外细胞培养和主动型ITP 小鼠模型，从细胞和分子水平揭示TRAIL对P-gp介导的激素抵抗在ITP中的调控作用和机制，并探索进行临床干预的可行性，为临床治疗提供新的思路。

糖皮质激素是国际ITP诊疗指南推荐的一线治疗首选药物，然而有相当比例的患者存在激素抵抗。ITP患者P-gp表达及功能上调，通过减少细胞对激素的摄取导致激素抵抗的发生，但其上游调控机制尚不清楚。在前期研究的基础上，我们提出TRAIL通过抑制DNA-PKcs/Akt/GSK-3β通路调控P-gp介导的激素抵抗的假设，通过ITP患者PBMC体外分选培养以及构建主动型ITP小鼠模型进行验证。研究结果显示，激素耐药的ITP患者P-gp表达和功能明显上调，这种改变在各淋巴细胞亚群中具有普遍性，同时TRAIL表达水平下降，而TRAIL受体TRAIL-R1/DR4以及TRAIL-R2/DR5的表达水平无明显异常，提示TRAIL表达水平的下降有可能参与ITP患者P-gp介导的激素耐药的病理生理过程。激素耐药的ITP患者存在各淋巴细胞亚群DNA-PKcs上调以及Akt、GSK-3β磷酸化增加，这种变化与细胞表面P-gp表达及功能的上调具有一致性，提示DNA-PKcs/Akt/GSK-3β通路参与P-gp表达和功能的调控。外源性TRAIL干预明显抑制激素耐药的ITP患者以及ITP模型小鼠各淋巴细胞亚群DNA-PKcs表达以及Akt、GSK-3β磷酸化水平，并降低P-gp表达和功能水平。综上，P-gp介导的ITP患者激素抵抗上游受到DNA-PKcs/Akt/GSK-3β通路的调控，可能和TRAIL表达水平下降，对该通路的抑制作用减弱有关，外源性TRAIL干预能够恢复对该通路的抑制，进而下调P-gp表达水平和转运功能。本研究证实了TRAIL可以通过DNA-PKcs/Akt/GSK-3β通路调控P-gp介导的激素抵抗，为ITP的治疗提供了新的潜在靶点。.在项目基金的资助下，已发表国内核心期刊论文1篇，主要研究数据整理总结并撰写研究论文中。培养硕士研究生2人，已毕业。