基于胆道微生态异常的肝移植术后胆道损伤的机制研究

Bile duct injury makes the major complication of liver transplantation, which affects survivals after the procedure, and also the main cause of re-transplantation. The incidence of bile duct injury is between 20%-30%, and infetion plays an important part especially in patients taking immunosuppressive agents. However, the available clinical laboratory technology could not provide etiology evidence for most bacteria or virus infection. In this subject, META-genomis sequencing technology is used to explore the species, gene expression and metabolic pathways of microbes by the means of genomics and metabonomics anylisis. To elucidate the mechanisms of how biliary microbiota abnormalities injures the bile duct would lay a foundation of diagnosis and treatment of bile duct injury after liver transplantation.

各种致病因素导致的胆道损伤是肝移植术后的主要并发症之一，也是影响移植后患者生存和再次肝脏移植手术的最主要原因，发生率在20-30%之间；移植术后由于免疫抑制抑制剂的使用，患者处于免疫低下状态，感染是肝移植术后胆道损伤的重要因素之一，然而很多细菌或病毒应用现有的临床培养等技术无法获得病原学证据。本课题应用宏基因组测序技术，通过基因组学和代谢组学分析探索肝移植术后胆道中致病微生物种类、基因表达和代谢通路，阐明胆道微生态异常导致的移植肝胆道损伤的机制，为临床肝移植术后胆道损伤的进一步诊治奠定基础。

本课题应用高通量测序技术对肝移植术后胆道并发症患者的胆道微生态进行研究，阐述胆道微生物的物种组成、丰度信息和多样性特点。通过与肝移植术后无胆道并发症的患者比较，分析物种组成和代谢通路的差异，从而为肝移植术后胆道并发症的临床诊治提供新的思路和依据。方法：纳入的研究对象均为2015年9月至2018年12月在我中心就诊的肝移植术后患者。将符合纳入标准的患者分为对照组，胆道并发症组。留取胆汁样本并提取样本DNA。对16srDNA进行Miseq高通量测序，测序结果进行生物信息学分析。结果：胆道并发症组胆汁样本在门水平的主要物种组成和丰度为变形菌门（55.20%），厚壁菌门（32.36%），放线菌门（10.24%），拟杆菌门（1.23%）。在属水平的主要物种组成和丰度为假单胞菌属（23.31%），克雷伯氏菌属（18.42%），乳球菌属（9.61%），红球菌属（9.59%），根瘤菌属（5.08%）。在属水平的主要物种组成和丰度为拟杆菌属（25.99%），普雷沃氏菌-9属（10.81%），肠球菌属（7.85%），Parabacteroides属（5.80%），Escherichia-Shigella属（5.76%）。胆汁样本的物种差异分析示变形菌门在有症状组富集，而厚壁菌门在对照组富集（P<0.05）；葡萄球菌属在有症状组富集，而肠球菌属在对照组富集（P<0.05）。KEGG代谢通路差异分析示乙醛酸和二羧酸代谢、卟啉和叶绿素代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、甘氨酸丝氨酸和苏氨酸代谢、细菌分泌系统、细菌趋化等代谢通路在有症状组胆汁样本中富集（P<0.05）。结论：在胆道并发症组胆汁样本中富集的差异物种和代谢通路，可能参与肝移植术后胆道并发症的发生及发展过程。