乙型脑炎病毒NS1蛋白的保护性抗原表位及免疫保护机制研究

The non-structural protein 1 (NS1) of flavivirus was recognized as an enigmatic protein, the protein function in virus replication, pathogenicity and immuno-protection were ambiguous till now. NS1 can maintain high concentration in the vessel and stimulate high level of antibodies. These antibodies cannot neutralize virus in vitro, while have high protection rate in vivo, even higher than the neutralizing antibody. But there has no report on the mechanism of NS1 immuno-protection yet. In this project, the NS1 protein will be employed to stimulate different kinds of cells in vessel in vivo. By analysis the changes in permeability of endothelial cells, the NS1 function in viral pathopoiesis will be revealed. Meanwhile, the protective monoclonal antibody against NS1 is used to block the functional sites in NS1 protein. The effects on pathogenicity of this blocking will be detected in vivo. This project will raise a new mechanism of NS1 immuno-protection.

非结构蛋白1（NS1）是目前公认的乙型脑炎病毒的一个功能神秘的蛋白，对于该蛋白在病毒复制、致病和免疫中的功能未知。NS1蛋白刺激机体产生的抗体对病毒没有中和作用，但在体内却可产生很高的保护力，关于此种免疫保护机制的研究尚未有报道。本项目中将用NS1蛋白在体外和体内刺激相关细胞，研究NS1在体内导致的血管通透性改变和在病毒致病中的功能；同时用具有保护活性的NS1蛋白单克隆抗体，与NS1互作后检测其在体外和体内对NS1蛋白相应功能的封阻作用，以及这种作用在免疫保护中发挥的功能，为阐明NS1蛋白免疫保护机制奠定良好的基础。

非结构蛋白1（NS1）是目前公认的乙型脑炎病毒的一个功能神秘的蛋白，对于该蛋白在病毒复制、致病和免疫中的功能未知。NS1蛋白刺激机体产生的抗体对病毒没有中和作用，但在体内却可产生很高的保护力，关于乙型脑炎病毒NS1蛋白中保护性抗原表位和保护机制的研究中仍未有任何报道。本项目中，以NS1诱导的保护性免疫位点及机制为主要研究内容，用杆状病毒表达的NS1蛋白免疫小鼠，构建了乙型脑炎病毒NS1蛋白的单克隆抗体13株，从中筛选出具有保护力的单克隆抗体2株，保护率分别为40%和70%；对具有较高保护力的单抗2B8，开展了抗原位点分析，鉴定出保护性抗原表位为ETHTLW，抗体结合关键氨基酸为T228、H229、L231、W232等4位氨基酸；开展了免疫保护机制的评估，发现这些保护性单抗均不具备细胞外的病毒中和活性，而是通过抗体抑制病毒在外周复制以及向中枢的传播而发挥抗病毒效果。同时在构建的多株单克隆抗体的基础上，建立了NS1蛋白阻断ELISA抗体检测方法、乙型脑炎病毒双夹心ELISA检测方法，这些方法在乙型脑炎的诊断及流行病学调查中具有重要的意义。.项目中在鉴定乙型脑炎病毒NS1蛋白中保护性抗原表位方面为国际上首次，在构建NS1蛋白双抗体夹心ELISA以及阻断ELISA方面为国内首次。