Hedgehog信号通路对肝星状细胞激活及凋亡的影响

本研究拟分离培养大鼠的肝星状细胞（HSC），并以建立的HSC细胞系为工具，首先采用RT-PCR和免疫细胞化学的方法检测新鲜分离的HSC和HSC细胞系中Hedgehog信号通路配体和信号通路各种成分的表达情况。在明确了Hedgehog信号通路各成分的表达情况的基础上，设计出Hedgehog的RNA干扰片段，构建含H1启动子真核表达载体psilencer 3.1-h1 neo，转染新鲜分离的HSC和HSC细胞系。采用Hedgehog responsive荧光素酶报告基因检测对HSC中Hedgehog的活性进行检测。在体外研究Hedgehog信号通路对HSC激活和凋亡的作用。然后，将真核表达载体通过门静脉系统转染肝纤维化大鼠的HSC，在体外和体内实验两个层面来研究采用Hedgehog信号通路对HCS激活和凋亡的调控作用以及在肝纤维化发生发展中的作用。