艾蒿水提物对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的影响及其机理研究

Based on the previous research work, this project will take the methods of the combination of in vivo experiments and in vitro experiments to study systematically the effects of Artemisia argyi aqueous extract on immune and antioxidative functions in broilers and the underlying mechanisms. The in vivo experiments will investigate the effect of Artemisia argyi aqueous extract (AAE) on the immune and antioxidative indexes including serum immunoglobulins, cytokines, nitric oxide, inducible nitric oxide synthase, malondialdehyde and antioxidases, and explore the molecular mechanism of immune and antioxidative actions of AAE. In the experiments in vitro, the main active components (polysaccharide, flavone) of AAE will be isolated and identified, and lymphocyte incubation tests in vitro will be conducted to study the immune and antioxidative functions of the main active components, so that we can find out the material foundation related to immune and antioxidative functions of AAE. The completion of this project will have important academic value for in depth understanding of the regulating mechanism of AAE on broiler immune and antioxidative function, and provide a theoretical basis for scientific applications of natural green mugwort additive, and have important practical guidance significance in broiler production.

本项目在前期研究工作的基础上，利用体内法和体外法相结合，系统研究艾蒿水提物对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的影响及其作用机理。利用体内法分别研究了艾蒿水提物对常规饲养条件下和免疫应激状态下肉仔鸡血清免疫球蛋白、免疫细胞因子、一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶、丙二醛及抗氧化酶等免疫、抗氧化指标的影响，并从分子水平上探讨艾蒿水提物产生免疫和抗氧化活性的机理；利用体外法对艾蒿水提物中的主要活性成分(多糖和黄酮)进行分离鉴定，并且通过体外淋巴细胞培养试验对其免疫和抗氧化活性进行比对研究，以确定艾蒿水提物产生免疫和抗氧化活性的物质基础。项目的完成对深入了解艾蒿水提物对肉仔鸡免疫、抗氧化机能状态的调控机理具有重要的学术价值，为科学应用天然绿色的艾蒿添加剂提供理论依据，在生产中具有重要的实践指导意义。

本项目利用体内法与体外法相结合深入研究了艾蒿水提物（AAE）对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的影响，并从TLR4/NF-κB信号途径系统地探讨了AAE及其主要活性成分（多糖、黄酮）缓解免疫应激的分子机制，为科学应用艾蒿水提物绿色添加剂提供理论依据。体内法研究了AAE对肉仔鸡血清免疫球蛋白、免疫细胞因子、抗氧化酶等免疫、抗氧化指标的影响，并从分子水平上探讨了AAE的免疫、抗氧化作用的产生机理；体外法对AAE中的主要活性成分多糖、黄酮进行分离，并且对其免疫、抗氧化活性进行对比研究，以确定AAE产生免疫、抗氧化活性的物质基础。动物试验结果表明：饲喂AAE显著提高了肉仔鸡的胸腺指数，抑制了由LPS刺激引起的脾脏指数及血清中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、NO、IgG含量和iNOS活性的升高，降低了肉仔鸡血清MDA含量，提高了血清中CAT和GSH-Px活性；降低了LPS刺激下肉仔鸡体组织中TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS的基因表达量，提高了CAT、SOD和GSH-Px的基因表达量，从而降低炎性细胞介质的释放，促进肉仔鸡的抗氧化能力。体外试验结果表明：艾蒿多糖可以通过调节TLR4/NF-κB信号通路来发挥其抗炎免疫作用，且艾蒿多糖的抗氧化作用也可能促进了其抗炎、抗应激作用；艾蒿黄酮提高了外周血淋巴细胞抗氧化酶活性，增强了对活性氧分子的清除能力，从而抑制了NF-κB的活性，并下调了下游炎性细胞介质的表达。以上试验结果提示，日粮中添加AAE对LPS刺激引起的炎性细胞介质有一定的抑制作用，并可以下调过度激活的免疫系统，对肉仔鸡遭受免疫应激后机体恢复有显著作用；日粮中添加AAE降低了TLR4/NF-κB信号通路相关基因的过度表达，这说明AAE可以通过抑制LPS诱导的TLR4的过度表达，从而抑制下游信号通路中相关炎性因子的过度表达，这进一步揭示了AAE缓减免疫应激的机制。