葛花解酲方对乙醇性HBV转基因小鼠肝癌前病变相关基因的影响及对Wnt/β-catenin信号转导通路的调控作用

流行病学研究显示，我国肝癌的主要危险因素是： 乙肝（HBV）和饮酒等。过量饮酒可引起乙醇性肝硬化，其中10％-30％最后发生肝癌；如果酗酒同时又并发HBV，其肝癌发生率可高达50％以上。我国既是HBV高发区又是白酒消耗大国。因此，本研究将专门针对HBV感染同时饮酒的肝癌高危人群，建立的乙醇性HBV转基因小鼠肝癌癌前病变模型，为肝癌前病变动物模型的建立探索新的方法，为深入研究肝癌发生发展的分子生物学机制奠定基础。同时,前期研究发现:葛花解酲方对稳定肝细胞，减少肝细胞破坏具有重要作用。本项目拟从组织、蛋白及细胞水平三位一体，探讨葛花解酲方对模型小鼠肝组织中p27、frissled-7、hTERT和GPC-3 mRNA表达的影响及对Bcl-7402肝癌细胞Wnt/β-catenin信号转导通路的调控作用。这对于寻求阻断和逆转肝细胞癌变病理进程的新途径，对有效预防肝癌的发生有着重大而深远的现实意义

1.项目背景：肝细胞癌 是世界上最常见的原发性恶性肿瘤。肝癌具有潜伏期长、进展快、恶性程度高、易转移等特点。早期发现、早期诊断、早期治疗是肝癌防治的关键，而预防和阻断肝癌癌前病变的发生尤为重要。葛花解酲方来自李东垣的《脾胃论》，治疗上散渗结合，分消酒湿，温中健脾，消补兼施的，是解酒名方。前期研究发现葛花解酲方对稳定肝细胞，减少肝细胞破坏具有重要作用。由此开始验证葛花解酲方改善肝癌癌前病变的作用并探讨作用机制的研究。.2.主要研究内容：（1）建立荷H22肝癌细胞小鼠皮下移植和原位移植两种模型，对其灌服葛花解酲方，观察葛花解酲方对IL-1、TNF-α、SOD、GSH-Px、MDA的影响以及肿瘤组织APC和端粒酶蛋白表达水平的改变表达的影响。（2）建立乙醇、HBV 双因素诱导的肝癌癌前病变小鼠模型，成功建立模型小鼠，进一步研究肝癌癌前病变打下坚实基础。（3）建立乙醇性HBV转基因小鼠肝癌癌前病变模型，观察葛花解酲方对模型小鼠ALT、AST、GST、GGT在血清中的表达水平及对CyclinD1、CDK4及p27表达的影响。验证葛花解酲方对肝癌癌前病变具有改善作用并探究其可能的机制。.3.重要结果：①葛花解酲方4g/ml浓度下能够调节IL-1和TNF-α的分泌水平、其抑瘤作用可能与抑制APC的阳性表达相关。②葛花解酲方可调节SOD、MDA、GSH-Px的表达水平，具有抗氧化损伤作用，进而减缓模型小鼠癌变进程。③乙醇、HBV 双因素刺激可加重HBV转基因小鼠的肝损伤并且出现肝癌癌前病理变化。④葛花解酲方能够有效降低酒精性肝损伤所致的小鼠血清ALT、AST、GST、GGT活性升高,具有保肝护肝的作用；葛花解酲方能够下调CyclinD1和CDK4的表达，上调p27的表达。⑤40%浓度的葛花解酲方含药血清可明显抑制HepG2细胞增殖，且此浓度下HepG2细胞与对照组相比其凋亡率最高，又能够下调C-myc基因表达。.4.意义：葛花解酲方对肝癌细胞癌皮下移植小鼠、原位移植小鼠和乙醇、HBV 双因素导致的肝癌癌前病变小鼠相关影响因子具有作用，这表明葛花解酲方可以一定程度的改善肝癌前病变，这对于寻求阻断和逆转肝细胞癌变病理进程的新途径，对有效预防肝癌的发生有着重大而深远的现实意义。