利用miR-155转基因小鼠解析miR-155在鼻咽癌发生中的作用及机制

迄今鼻咽癌(NPC)病因和发病机制尚未明确。microRNA(miRNA)参与肿瘤发生；在鼠体内过表达miR-155可诱发淋巴瘤、白血病和骨髓瘤，miR-155在人NPC组织和细胞株上表达水平上调, 提示miR-155亦可能参与NPC发生。为阐明miR-155在NPC发生中的作用及机制，本项目拟在我们运用Cre/lox P系统成功建立条件性表达miR-155的转基因小鼠基础上，将其与Cre转基因鼠交配以激活鼠鼻咽miR-155转基因表达，于不同时间点采集鼠鼻咽组织行病理检测，采用基因芯片、PCR Array和蛋白质组学方法筛选差异表达的关键基因和蛋白，进而功能验证，结合临床标本检测，明确miR-155在NPC发生中的作用及机制。此外，发挥miR-155与促癌物协同作用以基于miR-155转基因鼠建立能模拟人NPC发生的疾病模型。预期成果将为研究NPC发病机制提供宝贵线索和强大体内研究工具。

首先，执行本课题促进了南方医科大学肿瘤研究所转基因小鼠制作平台的构筑, 培养了从事显微操作的专职技术员——贾俊双老师，本所转基因小鼠制作平台已能通过原核显微注射和慢病毒载体法制作转基因小鼠。其次, 依托该转基因平台，运用Cre/lox P系统成功建立了条件性表达miR-155的Rm155LG转基因小鼠，并证实Cre/lox P系统在Rm155LG鼠上能够正常工作，这些为揭示miR-155在实体肿瘤(包括鼻咽癌(NPC))发生中的作用奠定基础。第三，创建了利用小物活体荧光成像法可视化、简单而快捷地筛选纯合子转基因小鼠的方法，其可靠性、重复性和实用性在本研究中得到充分证实。第四，基于Rm155LG小鼠成功建立了广泛（包括鼻咽部）过表达miR-155的RL-m155转基因小鼠。第五，我们的研究证实，miR-155可促进NPC细胞增殖、增强其干性、诱导NPC细胞发生EMT和侵袭，这些为进一步探讨miR-155在NPC发生中的作用奠定基础。第六，首次发现，miR-155过表达下调NPC细胞中Klf4表达；受miR-155调控的Klf4在NPC细胞和组织中呈低表达, Klf4对NPC细胞增殖、干性、迁移与侵袭起负向调控作用，沉默Klf4促进NPC细胞体内转移，Klf4抑制NPC细胞体外迁移与侵袭的能力由其靶基因E-cadherin介导， NPC临床组织标本揭示Klf4与NPC EMT有密切关系。第七，在RL-m155转基因小鼠和Rm155LG/Ub-Cre-ERT2双转基因小鼠鼻咽上皮实现miR-155转基因过表达后的不同时间点采集鼠鼻咽部组织，行HE染色以行组织病理分析。在观察的时间范围内（最长12月），在过表达miR-155转基因的鼠鼻咽上皮组织中均未见增生或非典型增生或其它病理变化等。目前，正在延长观察时间以明确在延长的时间段，过表达miR-155转基因的鼠鼻咽上皮组织中是否会出现病理变化。第八，单一过表达miR-155有可能无法诱发NPC，接下来将用促癌物(TPA与丁酸钠)处理miR-155转基因小鼠，以发挥miR-155和促癌物的协同作用得以在鼠鼻咽部较快诱发NPC，希望基于此建立能真实模拟人NPC发生过程的疾病动物模型。第九，执行本课题过程中，招收博士后1人，培养博士和硕士研究生各4人，培养中青年学术带头人1人，发表论文11篇，其中SCI论文8篇，IF>5的有5篇。