miR-155在人源化小鼠移植模型预后中的作用及机制研究

Exploring the “master regulator ”to diagnose the cardiac allograft vasculopathy earlier is key issues and challenges in the field of organ transplantation. In 21 human clinical blood samples，our studies on the expression of miR-155 showed the close correlation to allograft rejection. Further animal experiments verified that knockout of miR-155 ameliorates the Th1/Th17 immune response and tissue injury in chronic rejection. It strongly hinted that miR-155 could be the key to monitor the the progress of cardiac allograft vasculopathy, or the clinical intervention targets. In this project, we established the hunmanized mouse model of cardiac allograft vasculopathy(reconstruction of peripheral immune system by receptor, and the donor vessel is implanted ), and the expression level of miR-155 and its molecular mechanisms are investigated. Combined with large amounts of clinical trials, postoperative and survival analyses are performed. This project may provide a new theoretical basis of miR-155 application to translate research discoveries from the laboratory into clinical practice to diagnose and treat patients.

寻找关键调控因子，早期诊断和调控移植物血管病变，是当前器官移植领域的重点和难点。本项目组在21例心脏移植患者外周血淋巴细胞中miR-155表达进行检测，发现其表达变化与移植物排斥反应严重程度密切相关。进一步体外和动物实验证实： miR-155可影响Th1/Th17功能延缓移植物血管病变的发展进程。据此推测，miR-155可能成为监测移植物血管病变进展的关键分子，或可作为临床重要干预靶点。本课题拟建立人源化小鼠血管移植模型（即在重度免疫缺陷Balb/c Rag2-/-il2rg-/-小鼠中重建患者外周免疫系统，并移植入供体血管），研究miR-155及相关炎症分子IFN-R/IL17A机制及病理变化，并结合大宗临床心脏移植患者外周血标本，进行预后生存分析，为miR-155从基础研究向临床应用转化提供理论基础和实践经验。

miR-155可能成为调控移植物排斥反应的关键分子，或可作为临床重要干预靶点。本课题拟建立人源化小鼠皮肤移植模型（即在重度免疫缺陷Balb/c Rag2-/-il2rg-/-小鼠中重建患者外周免疫系统，并移植入人供体皮肤），研究miR-155及相关炎症分子IFN-R/IL17A机制及病理变化. 首先，在 huPBL-SCID-huSkin模型中，miR-155表达明显升高。AntagomiR-155能够明显降低移植物皮肤局部炎症反应，从而延长移植物皮肤生存时间，伴随着T细胞相关的炎症因子明显减少，尤其是IFN-γ/IL-17A明显减少。体外实验证实，antagomir-155 CD4+T淋巴细胞增殖明显减弱。分别在Th1//Th17培养条件下进行细胞诱导分化，检测到antagomir-155组IFN-γ/IL17A表达细胞比例明显降低。本部分研究对临床miR-155应用调控移植物排斥反应提供了理论基础，为miR-155临床转化应用提供重要科学依据，具有很强的实际意义。.为了研究miR155调节CD4+ T 细胞的作用靶点，对Th相关转录因子c-Maf, NR4A1, STAT6, SMAD2 and PU.1蛋白及mRNA分析。研究结果证实miR-155-/-组，NR4A1蛋白及mRNA表达明显降低。提示.miR-155可能通过正向调控NR4A1表达影响T细胞功能。我们构建同种异体心脏移植模型，发现移植物心脏局部浸润CD4+T细胞NR4A1表达明显升高。NR4A1在调节T细胞凋亡、分化、免疫细胞失功能方面扮演重要角色。CsnB，NR4A1抑制剂，在心脏移植物排斥反应中的病理变化尚无人研究。本课题组研究表明：明显延长心脏移植物存活时间，移植物局部炎症细胞浸润及血管病变明显减轻。进一步研究表明，Csn-B通过诱导non-Treg细胞（主要是IFN-γ/IL-17A相关细胞）凋亡，同时促进Treg细胞分化达到延长移植物存活时间。最终，还验证了Csn-B通过直接作用CD4+ T控制移植排斥反应进程。提示，Csn-B可能作为调控急性排斥反应的新的靶点。本部分研究，丰富了miR155-NR4A1-CD4T-IL17A/IFNγ轴环路对移植物排斥反应的具体机制。.