灵芝多糖多元色谱指纹图谱方法学及其免疫活性谱效关系研究

灵芝是中医药学宝库中的珍品，有"功能食品资源"之美誉。由于具有显著的免疫调节等多种生理功效，故近年来灵芝的研究和开发倍受关注。但因缺乏科学全面的检测方法和质量标准，大量人工栽培生产的灵芝孢子粉、子实体和菌丝体及其加工产品的质量良莠不齐，难以有效控制和鉴别。本课题拟针对灵芝的主要功效成分多糖类物质，研究采用酶法部分水解耦合多模式色谱分离分析技术检测和表征其特性，并利用信息融合算法整合其多维数据，进而构建不同种属、不同产地及不同部位的灵芝多糖多元色谱指纹图谱。同时，以免疫活性检测为引导，进一步研究谱效关系，建立灵芝多糖的免疫活性指纹图谱，并应用于市场上灵芝类产品中多糖的检测及质量评价。该课题将首次解决多糖类复杂大分子体系的色谱指纹图谱构建及其谱效关系研究中一些关键方法学问题；其成果对于其他多糖的功能相关性指纹图谱方法学的研究和灵芝及多糖类产品质量标准的提升与完善将具有重要的参考与应用价值。

灵芝由于具有显著的免疫调节等多种生理功效，故近年来灵芝的研究和开发倍受关注。但因缺乏科学、先进的检测方法和质量标准，大量人工栽培生产的灵芝孢子粉、子实体和菌丝体及其加工产品的质量良莠不齐，难以有效控制和鉴别。为此，本课题针对灵芝的主要功效成分即多糖类物质，研究采用部分酸水解和酸-酶部分水解耦合PMP柱前衍生化RP-HPLC与离子色谱分析技术检测表征其化学组成及结构特性，构建了不同种属（赤芝和紫芝）、不同部位（子实体、孢子粉及菌丝体）及不同产地的灵芝多糖色谱指纹图谱；并尝试其他多种不同色谱分离模式（HPSEC和钙型阳离子交换柱sugarpak1耦合RP-HPLC）分别构建了不同来源灵芝多糖的色谱指纹图谱, 为灵芝多糖的指纹分析提供了多种不同的方法选项。基于上述指纹数据，应用化学计量学方法（聚类分析和主成分分析）成功地建立了不同来源、不同质量的灵芝多糖的分析鉴定方法。此外，通过免疫活性检测，进一步研究了灵芝多糖的色谱指纹图谱与免疫活性之间的谱效关系，建立了表征灵芝多糖免疫活性的多元回归方程。本项目还对以往报道较少的灵芝孢子粉多糖的分离纯化及其各级分的构效关系进行了较系统深入的研究，发现其活性多糖的糖苷键主要为β-1,6和β-1,3及β-1,4构型，该结果正在应用于灵芝多糖指纹分析前处理即酸-酶部分水解方法的进一步深入研究中。本项目首次研究建立的一系列色谱指纹图谱及其免疫活性谱效关系的分析方法，对于解决复杂多糖类的质量检测的方法学问题和制定有效的质控标准具有较重要的参考意义和应用价值。