食管癌高发区同卵双胞胎食管癌和癌前病变组织DNA甲基化检测

同卵双胞胎(monozygous twin, MZ)来自同一个受精卵，基因完全相同，对比分析二者食管癌和癌前病变甲基化差异对阐明表遗传对食管癌变发生的影响具有重要意义。但因MZ出生率极低（总新生儿的1/250），食管癌和癌前病变的MZ患者更少见，限制了这一研究的开展。本研究组自95年在河南食管癌高发区建立现场研究基地，经对1500个自然村（300万人）流调，已积累1365对临床资料齐全的同/异卵双胞胎个体，发现58对恶性肿瘤患者（食管癌31对），并对197对无症状双胞胎进行内镜活检发现不同程度癌前病变患者。因此，本项目一改以往从家系和家族史阳性成员表遗传与食管癌变关系的研究思路，采用美国Operon 公司DNA甲基化芯片（含1万个基因），检测食管癌和癌前病变的MZ患者外周血和组织中的DNA甲基化差异，初步确定MZ食管癌甲基化谱，为下一步建立高危人群筛查和早期诊断的生物学指标奠定基础。

一..本项目预定研究内容主要包括：.1进一步完善双胞胎生物样品信息资料库建设，主要包括：1) 搜寻新的适宜双胞胎研究对象（>=30岁）；.2) 完善双胞胎食管癌患者生存随访和癌前病变患者跟踪随访及临床信息收集工作（每例150项）；3) 完成双胞胎食管癌和癌前病变患者血样和组织收集；.2. 完成双胞胎食管癌和癌前病变患者外周血和配对组织DNA甲基化芯片检测和分析。.二.本项目主要研究目标是发现双胞胎成员中食管癌和癌前病变患者与正常双胞胎成员之间的甲基化差异，并进一步阐明这些甲基化位点及相关蛋白表达变化在食管癌变中的作用机理，以及对阐明表遗传对食管癌变的影响奠定工作基础。.三.根据项目主要研究内容和目标，三年执行期间主要完成如下工作：.1.完善和扩大双胞胎生物样本信息资料库：由项目开始的1364对增加到1874对（新增加530对，28%）；新发现双胞胎食管/贲门癌患者20对（单发：16对；双发：4对）；走访1231个乡镇（4.6万个自然村），随访和入户问卷调查双胞胎1874对；完成22对（44例）无症状双胞胎胃镜检查、粘膜活检和组织病理学检查，双胞胎活检生物样品资料库增加到172对；新采集双胞胎血样530对；.2.甲基化检测：完成3对双胞胎及1对双胞胎家系食管癌患者和正常人18例外周血样甲基化芯片检测，同时完成2对（4个样品）全基因组甲基化测序，经芯片与测序结果比较，发现芯片检测差异甲基化位点明显少于测序，立即增加20对双胞胎食管癌患者外周血测序工作，并已全部完成。项目执行期间，共发表论文11篇（SCI：3篇；中文：8篇），培养硕士研究生6名，博士1名；应邀做双胞胎专题研究报告5次。.四.本项目预算经费35万，单位匹配35万，自筹资金30万；项目实际支出100万，超出预算经费部分主要用于现场流调和全基因组甲基化测序及分析。.五.目前本项目已基本完成20对食管癌双胞胎患者全基因组甲基化检测和分析以及200例食管癌和200例正常对照的验证工作，正在加紧最后分析和论文撰写。因经费所限，本项目执行期间未能完成双胞胎食管癌组织甲基化检测工作，将作为下一个国家自然科学基因基金项目的主要研究内容。