复方仙鹤草胶囊逆转白色念珠菌氟康唑耐药性机制研究

With the progress of the HIV/AIDS, diabetes, cancer, and the use of immunosuppressants, caused the increasing of systemic fungal infection. The problem of fungi resistance is getting worse, but new antifungal drugs are very limited. We need a different approach to solve this problem. Research showed that some Chinese medicine have synergy effect on resistant fungal . We also found that compound herba agrimoniae capsule, a traditional Chinese medicine, shows good activity on reversing Candida Albicans’ resistance to fluconazole, either in vitro or in mouse model experiment. The present study intends to: i) To comfirm the reverse effect of Hairyvein Agrimony solution on Candida Albicans’ resistance to fluconazole through in vivo and in vitro combination experiment; ii) To clarify the expression of fluconazole resistance genes (ERG11, CDR1,CDR2 and MDR) before and after treating with Hairyvein Agrimony solution; iii) To find cell signaling pathways and key proteins by comparing the difference in resistant strains before and after drug treatment through proteomics analysis and genetic identification. Our study will be helpful to determine the reverse mechanism of compound herba agrimoniae capsule on Candida Albicans’ resistance to fluconazole, which will provide theoretical basis to broaden its clinical application.

随着艾滋病、糖尿病、癌症的进展，免疫抑制剂的使用，系统性真菌感染呈现上升趋势。真菌耐药性的问题日益凸显和严峻，但新型抗真菌药物有限，需另辟蹊径解决真菌的耐药性问题，研究表明一些中药具有协同抗耐药真菌的作用。我们发现彝药复方仙鹤草胶囊在体外联合实验和小鼠模型实验中都显示了良好的逆转白色念珠菌氟康唑耐药性的活性，本项目拟：1)使用多株临床耐药株在体内和体外采用联合用药验证该药的耐药逆转作用；2)比对药物处理前后氟康唑耐药基因ERG11、CDR和MDR的变化，阐明该药对氟康唑耐药相关基因表达的影响；3)由于复方成分复杂，可能通过多种通路对耐药基因表达进行调控，将通过药物处理前后菌株蛋白组学差异分析和基因鉴定发现与耐药基因调节相关的信号通路及关键蛋白。本项目的完成将有助于明确彝药复方仙鹤草胶囊逆转白色念珠菌氟康唑耐药性的药效和作用机制，也为拓宽其临床应用范围辅助抗耐药真菌感染提供理论依据。

本项目顺利完成原计划的主要目标和研究内容，发表3篇文章，其中SCI1篇，中文核心1篇，科技核心1篇。.本项目从体内体外实验确证了彝族药复方仙鹤草胶囊联合氟康唑具有显著的协同抗耐药白色念珠菌的作用，作用机制与耐药相关外排泵基因CDR1、CDR2、MDR和ERG11无关。我们通过蛋白组学的分析研究发现可能与ATP的合成有关，因为主动外排泵cdrp1和cdrp2的功能依赖于ATP，我们通过ATP含量，线粒体膜电位、ROS等检测，结合蛋白组学分析，发现复方仙鹤草胶囊主要影响PFK26和FBP2下调以及PMI和FBA1的上调共同影响糖酵解过程，我们推测这四种差异蛋白影响6-磷酸果糖的产量，进而抑制糖酵解的进程，减少ATP的产能，我们的工作为探讨复方逆转真菌耐药性提供了新的思路。.此外我们在项目推进中，发现复方仙鹤草胶囊还具有促进获得性免疫的作用，可以明显增高耐药白色念珠菌侵袭性感染小鼠体内抗菌肽CRAMP的生成（人源为LL-37），说明复方仙鹤草胶囊除了可以逆转耐药性还可以从免疫调节的角度治疗白色念珠菌病，为全面理解复方仙鹤草的作用机制提供了新的视野，也为拓宽复方仙鹤草胶囊的临床应用提供理论依据。我们也将继续申报国家自然科学基金的资助，进一步推进复方仙鹤草胶囊促进获得性免疫重建的工作。