衰老海马MR/GR平衡与神经内分泌变化及补肾方作用研究

海马是具有重要功能的脑分区，富含盐皮质激素受体（MR）和糖皮质激素受体（GR）。近年研究表明，海马MR/GR平衡对HPA轴活性及海马神细胞凋亡有重要影响。对HPA轴活性调节，MR有兴奋作用，GR则表现抑制作用；对海马神细胞凋亡，MR有保护作用，GR则有促凋亡作用。 MR和GR的这种作用与中医阴阳特性相似。肾寓真阴真阳，是五脏明阳的根本，肾元虚衰，阴阳失调，可致整体功能下降而出现衰老。大量研究证明，肾虚与衰老时神经内分泌功能紊乱密切相关。本项目根据肾虚衰老、阴阳平衡及神经内分泌调节理论，以自然衰老大鼠为肾虚衰老动物模型，观察衰老大鼠海马MR/GR平衡、海马细胞凋亡和HPA轴活性的变化，分析衰老大鼠海马MR/GR平衡的变化与海马细胞凋亡及HPA 轴活性的相关性，并通过补肾方（左归丸、右归丸）作用反证，进一步探索肾虚衰老机理和阴阳平衡理论，为临床补肾抗衰和阴阳平衡理论的运用提供科学的实验依据。

项目从自然衰老大鼠海马MR和GR表达变化与HPA轴活性及海马神经细胞凋亡变化的相关性及两种补肾方对其的作用，探索肾虚衰老的机理和补肾方作用机制。项目研究根据肾虚衰老理论，采用SPF级SD雄性大鼠为实验动物，普通饮食、饮水喂养，至24月龄为自然衰老大鼠为肾虚衰老模型（老年对照组）；补肾方药（左归丸组和右归丸组）从大鼠20月龄开始应用，均按7.5g生药/kg体重/d自由饮用稀释药液，每周用药五天，停药两天，连续4个月；5月龄大鼠为青年对照组。项目通过观测海马组织形态学，发现老年大鼠海马组织细胞形态结构呈现退行性变化，左归丸和右归丸对这一组织形态结构的变化有一定的改善作用。核酸和蛋白水平检测发现老年大鼠海马CA1区及整体海马组织GRmRNA与MRmRNA表达均下降，左归丸与右归丸均可上调老年大鼠海马CA1区及整体海马组织GRmRNA及MRmRNA表达；老年大鼠整体海马组织GR蛋白表达水平有下降趋势，MR蛋白表达水平显著下降，左归丸与右归丸均可上调老年大鼠海马组织MR蛋白表达，对海马组织下降的GR蛋白表达也有一定上调作用。老年大鼠海马CA1区Bcl-2mRNA表达下降，P53mRNA和BaxmRNA表达上升，左归丸与右归丸均可上调老年大鼠海马CA1区Bcl-2mRNA表达，下调P53mRNA和BaxmRNA表达；老年大鼠整体海马组织BaxmRNA表达上升，Bcl-2mRNA表达有降低趋势，P53mRNA表达水平有升高趋势，左归丸和右归丸均未显示出对这一变化的改善作用；老年大鼠整体海马组织P53表达有升高趋势，Bax蛋白表达升高， Bcl-2蛋白表达下降，左归丸和右归丸均未显示出对这一变化的调节作用。老年大鼠血浆ACTH和血清CORT含量显著增高，左归丸和右归丸可降低老年大鼠血浆ACTH和血清CORT含量。通过项目研究结果分析，我们认为老年大鼠HPA轴功能亢进可能是肾虚致衰的机理之一，左归丸和右归丸通过调节GR和MR的表达、进而改善老年大鼠亢进的HPA轴功能可能是中医补肾抗衰的机制之一；老年大鼠海马神经细胞凋亡相关指标的变化并不明显，左归丸和右归丸对海马神经细胞凋亡相关指标的变化亦未显示出明显的改善作用，老年大鼠海马GR和MR表达的变化与海马神经细胞凋亡之间的关系有待进一步研究。