TRB3对肝癌细胞凋亡的影响及其机理的研究

TRB3是内质网应激信号途径的重要分子，在诱导细胞凋亡过程中起着重要的作用，然而其发挥作用的具体机制尚不清楚。我们在研究钌类化合物诱导细胞凋亡的过程中发现：做为CHOP的下游信号分子，TRB3的表达能够诱导肝癌细胞的凋亡；进一步研究发现，TRB3可致肝癌细胞的ROS产生增加，并导致肝癌细胞线粒体膜电位降低，然而其机理尚未完全阐明。本研究在此工作的基础上，设想TRB3通过影响细胞线粒体ROS的产生及抑制Akt途径的促凋亡功能而诱导细胞凋亡；通过采用CO-IP、Western blot及siRNA等多项技术，研究TRB3对PI3K/Akt信号途径及ROS信号途径的影响与作用，包括通过何种凋亡机理最终诱导了肝癌细胞的凋亡。课题的完成将可能发现新的促细胞凋亡的信号分子，为肿瘤的治疗提供可能的靶标。

1应用Thapsingargin诱导HepG2细胞的ER Stress，以qPCR和Westernblot检测内质网应激信号分子TRB3、ATP6、XBP1、CHOP、ATF4、及Akt mTOR等相关基因，在应激状态下TRB3对ER Stress基因表达以及对Akt信号途径有明显的影响，.2 以TRB3表达载体转染HepG2细胞，再以Thapsingargin，检测上述相关基因的表达状况，观察TRB3过表达对HepG2细胞生长及凋亡的影响；RNAi分别沉默TRB3、CHOP及Akt，其明显影响细胞生长（MTT）及细胞凋亡的影响..3 以Cisplatin诱导HepG2细胞耐药性的产生（97H，97H-S），以定量PCR及Western blot检测ROS相关基因在耐药细胞HepG2res 中TRB3表达的变化，MTT实验发现，采用RNAi沉默TRB3后能恢复细胞对化疗药物的敏感性，Western blot 进一步研究发现Akt,ASK1,MKK,JNK等在耐药细胞株中表达增加，CHOP表达降低。