hRad9/chk1通路与乳腺癌化疗耐药及恶性行为机制探讨

hRad9/chk1通路在DNA损伤修复和基因组稳定维护中具有重要作用。本课题采用临床回顾性研究，筛选收集乳腺癌临床随访及术后标本1650例，分层分组，高分辨率多色荧光原位杂交（M-FISH）检测hRad9和chk1基因拷贝，免疫组化检测蛋白表达，Feulgen检测DNA倍体，探讨hRad9/chk1与乳腺癌染色体不稳定性的关系及其在肿瘤恶性行为和预后中作用；体外实验，小干扰 RNA(siRNA)技术沉默hRad9基因和UCN-01封闭chk1，实时检测hRad9、chk1基因和蛋白表达及蛋白磷酸化水平，探讨抑制hRad9/chk1通路对人乳腺癌细胞株MDA-MB-134、MPE600、MCF-7以及阿霉素耐药细胞系MCF-ADR的化疗增敏和耐药逆转作用。该研究对揭示hRad9/chk1通路在乳腺癌化疗耐药及恶性行为中的作用机制、寻找新的抗癌药物靶点具有十分重要的理论价值和潜在临床意义。

hRad9定位于染色体11q13，通过激活下游因子chk1在DNA损伤修复和基因组稳定维护中具有重要作用，但关于其在乳腺癌化疗耐药中的作用研究较少。本课题筛选收集中瑞两国乳腺癌临床标本，制作组织芯片，建立临床资料库。采用高分辨率多色荧光原位杂交（Multicolor Fluorescence in situ hybridization，M-FISH）技术，我们研究发现11q13基因CCND1扩增和 11q远端基因CHK1杂合性缺失密切关联，Chk1杂合性缺失在肿瘤发生早期的原位癌阶段即可出现，提示Chk1基因缺失可能是乳腺癌的早期分子生物学事件，而11q13基因扩增与乳腺癌恶性行为进展和侵袭性强密切相关。我们同时发现乳腺中常见hRad9 基因的扩增，且多伴有CCND1共同扩增的情况。 通过对乳腺癌新辅助化疗的术后标本化疗反应性分析，我们发现hRad9 的高表达与chk1蛋白高表达密切相关，两者的高表达并与患者化疗耐药密切相关。体外研究发现，RNA干扰技术沉默hRad9基因表达可显著抑制其下游因子chk1的表达，从而提高乳腺癌细胞的化疗敏感性。该研究对揭示hRad9/chk1通路在乳腺癌化疗耐药及恶性行为中的作用机制、寻找新的抗癌药物靶点具有十分重要的理论价值和潜在临床意义。通过该项目研究，我们发表SCI收录论文1篇，（Histopathology，5年平均影响因子3.825）；国际学术会议交流论文摘要1篇（第29届国际病理学会（IAP）大会，南非开普敦，2012）；培养了多名研究生和青年科研骨干；与瑞典卡罗琳斯卡医学院Anders Zetterberg教授的研究小组建立了长期稳定的合作关系。