c-Myb介导的MLL/AF4对HOXA9/MEIS1的调控及其在难治性急性淋巴细胞白血病中的作用机制研究

MLL基因重排与难治性急性白血病发病密切相关，染色体t（4；11）易位形成MLL/AF4融合基因，是MLL重排急淋的主要分子生物学基础，但深层机制不明。申请者前期工作发现：MLL/AF4融合蛋白以c-Myb为中介结合于白血病致病关键基因：HOXA9/MEIS1基因的启动子区；而c-Myb作为骨髓造血、白血病发病的重要调控因子，又与HOXA9之间存在正反馈调节关系，提示MLL/AF4-c-Myb-HOXA9/MEIS1调节轴在MLL重排急淋中可能起重要作用。为此本研究拟采用shRNA、转基因等技术手段，以c-Myb为桥梁，通过体内、外系统研究，明确MLL/AF4是否调控HOXA9/MEIS1基因甲基化修饰及表达，进而引起白血病转化，全面分析MLL/AF4-c-Myb-HOXA9/MEIS1调控网络。本研究的开展不仅有助于深入探讨MLL/AF4急淋的发病机制，也为寻找新的治疗分子靶点奠定基础。

MLL基因重排与难治性急性白血病发病密切相关，前期工作发现：MLL/AF4融合蛋白以c-Myb为桥梁结合于白血病致病关键基因：HOXA9基因的启动子区。本研究进一步证实：在表达MLL/AF4的急性白血病细胞株和白血病原代细胞中，MLL/AF4、c-Myb调节HOXA9/MEIS1表达，将细胞周期阻滞在G0/G1期，从而调控白血病细胞增殖，二者具有协同作用。MLL/AF4-menin-c-Myb复合物不仅与HOXA9基因启动子区结合也与MEIS1基因启动子区结合，但与HOXA9/MEIS1组蛋白H3K4甲基化及启动子CpG岛甲基化无关，而是通过调节组蛋白H3K79甲基化，调控HOXA9/MEIS1基因表达，从而进一步调控白血病细胞增殖和细胞周期。因此，组蛋白H3K79可作为具有MLL/AF4基因重排急性白血病的潜在治疗靶点。.另一方面，我们的同步研究发现：具有MLL基因重排的急性白血病患者，往往具有FLT3 ITD突变或FLT3高表达。因此我们初步研究分析了表达MLL/AF4融合蛋白的急性白血病细胞株中， FLT3 ITD突变对硼替佐米药物敏感性的影响。结果发现：表达MLL/AF4融合蛋白、但无FLT3 ITD突变的急性淋巴细胞白血病细胞株：SEM和RS细胞株对蛋白酶体抑制剂有高度敏感性，而同时具有MLL/AF4和FLT3 ITD突变的MV4-11细胞株对蛋白酶体抑制剂不敏感。为此我们构建了MLL/AF4等病毒载体，为后期进一步研究FLT3 ITD突变对MLL/AF4药物敏感性的影响打下了基础。