调控TLR2/4-TRAF6信号转导保护大鼠同种异体肾脏移植物

基因敲除动物实验和临床研究证明TLR2与TLR4与肾脏缺血再灌注损伤的发生和移植肾远期转归密切相关。本课题组前期研究在大鼠原代肾近端小管上皮细胞发现沉默TLR信号通路的适调蛋白TRAF6基因，可抑制由TLR4激活而诱导的炎症反应并改善肾小管上皮细胞的活力。最近研究证明microRNA-146a是TLR2和TLR4通路NF-kappaB下游产物，特异性下调IRAK1和TRAF6，抑制下游TNF-alpha，IL-8，和RANTES产生。本项目在前期工作基础上，利用寡核苷酸经肾小球滤过后可被肾小管上皮细胞良好吸收的特点，探讨用特异性microRNA调控TLR2/4-TRAF6信号通路对大鼠肾小管上皮细胞炎症和细胞损伤的保护作用，并在大鼠同种异体肾移植模型探讨以特异性microRNA干预TLR2/4-TRAF6信号通路对减轻移植肾早期损伤，改善远期转归的作用。

内源性配体引起的TLR2/4-TRAF6信号通路持续激活，可能是启动和维持移植肾的急性和慢性损伤，导致移植肾失功的关键因素。本项目在前期研究基础上，探讨以miR-146a为切入点调控肾脏TLR2/4-TRAF6信号转导对移植物组织细胞损伤的保护作用。体外研究分别在大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E和原代大鼠近端肾小管上皮细胞证实其可良好摄取外源性miRNA-146a。肾小管上皮细胞存在TLR2/4-TRAF6-miR-146a环路。持续激活TLR4可上调miR-146a，抑制肾小管上皮细胞存活，而在TLR2未观察到类似效应。在miR-146a抑制物作用下TRAF6水平增高，提示miR-146a对TRAF6有负调控作用。LPS可激活TLR4下游多条信号通路，其中MEK/ERK可能参与增强肾小管上皮细胞活力，而其他途径可能抑制肾小管上皮细胞生长或存活；miR-146a可能抑制基础状态下ERK磷酸化，抑制miR-146a可增强ERK1/2激活，有助于保护LPS作用下肾小管上皮的生存。动物实验证实经肾动脉导入miR-146a表达载体可被肾小管上皮细胞吸收，转导效率尚待优化。