Tim-3调节巨噬细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生发展中的作用

巨噬细胞介导的炎症反应是动脉粥样硬化（AS）的重要发病机制。新型免疫分子Tim-3是Th1细胞特征性的负调控因子，在多种自身免疫病和炎症性反应性疾病中发挥重要作用，并与AS的多种危险因素密切相关。近期发现，Tim-3高表达于单核/巨噬细胞，但Tim-3对巨噬细胞功能的调节作用及机制尚不明确。申请者前期研究发现，AS患者外周血单核细胞Tim-3的表达水平显著高于正常对照，在AS小鼠斑块中可检测到Tim-3的表达，同时发现Tim-3可调节巨噬细胞NO的分泌。据此，本课题提出Tim-3可能通过调节巨噬细胞介导的炎症反应参与AS发生发展的假说。申请者拟通过临床病例检测，结合成熟的细胞、动物实验技术，在体内外进行深入研究，明确Tim-3调控巨噬细胞介导的炎症反应在AS发生发展中的具体作用及参与的信号通路分子，将为阐明AS发病机理和Tim-3基因功能提供新的实验数据，并为AS的预测和治疗提供新的靶点。

.本项目围绕Tim-3探讨其在AS发生中的作用，分别从临床标本检测、细胞模型及动物实验三个方面展开相关研究，并基于该项目进行一定拓展。首先，利用动脉粥样硬化（AS）患者及健康对照，检测发现冠心病患者单核和NK细胞上Tim-3表达水平显著高于健康对照，并且单核细胞和NK细胞上Tim-3的表达水平与TNF-α及CRP呈正相关，提示Tim-3与AS病人体内炎症水平相关，另外，Tim-3可能主要通过调控巨噬细胞和NK细胞参与AS（部分结果发表于Atherosclerosis. 2012;222(1):67-73.）。利用LPS/ox-LDL活化小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7，检测Tim-3表达，结果发现LPS/ox-LDL可诱导Tim-3的表达，干预Tim-3检测其对炎症因子表达的影响及信号通路的变化，发现Tim-3促进TNF-α等促炎因子的分泌，初步推测AS患者单核/巨噬细胞Tim-3表达的上调可能参与促进动脉粥样硬化的发生发展，相关结果尚在整理之中。利用ApoE-/-小鼠进行高脂饲养建立AS模型，并给予Tim-3 shRNA慢病毒或对照。RT-PCR结果显示给予Tim-3 shRNA病毒的ApoE-/-小鼠各脏器内Tim-3表达显著减低，并显著减轻动脉粥样硬化病变，相关结果尚在整理之中。. 另外，增添了以下研究内容：.1..拓展了Tim-3在系统性红斑狼疮（SLE）发生中的作用研究，发现SLE患者外周血单核细胞Tim-3的表达水平显著升高，并与疾病进程相关。.2..启动TRAIL基因1595位点C/T单核苷酸多态性(rs1131580)与II型糖尿病（T2DM）的相关性研究，发现T2DM患者该位点CC基因型的频率显著高于正常对照，而且CC基因型T2DM患者血甘油三酯、肌酐水平显著高于TT基因型的患者（文章发表于Genet Mol Res. 2013;12(3):3455-3464.）。. 本项目基本按计划完成各项研究指标，相关结果发表SCI收录论文2篇，项目负责人连续两届在全国免疫学会议进行三个分会场报告，并在国际性会议进行口头报告，得到与会专家的好评，另培养硕士研究生2名。