补阳还五汤对肺纤维化中介导细胞自噬的mTOR蛋白调控机制研究

Recently research indicated that mTOR is a very important regulatory factor of cell growth and proliferation, it can mediate TGF-β of conduction, and has closely related to various fibrotic diseases. The activation of autophagy mediated by mTOR play an important role of IPF. Our preliminary research found that Buyanghuanwu decoction can reduce the content of TGF-β1mRNA、Smad3mRNA, which shows that the multitargets pharmacological mechanism of Buyanghuanwu decoction has much regulating effect on autophagy in cells of IPF, Buyanghuanwu decoction has potential application value in treating of IPF. With guidance of TCM theory, we make our target of autophagy, and use mTOR as point of penetration to apply BLM to induce the mice PF model, and make NLFB and MRC5 as evaluation of effective carrier with S6 irritation to observe Buyanghuanwu decoction’s regulation mechanism of activating mTOR and inhibiting autophagy in IPF, and we discuss the mechanism and clinical value of Buyanghuanwu decoction in pulmonary fibrosis.

最新研究表明，mTOR蛋白是细胞生长和增殖的重要调节因子，可以感受TGF-β信号转导，与多种纤维化疾病密切相关，其介导的胞内自噬机制在IPF病理过程中发挥着重要的桥梁作用。课题组前期研究发现，补阳还五汤具有抑制肺纤维化大鼠血清TGF-β1过度表达，显著下调TGF-β1mRNA、Smad3mRNA含量，提示补阳还五汤的多靶点分子药理机制对IPF病理过程中肺内自噬机制有良好的调控作用，在肺纤维化的治疗中具有潜在的应用价值。本研究在中医理论指导下，基于经典的细胞能量代谢“自噬”机制，以mTOR蛋白为切入点，围绕IPF中肌成纤维细胞转分化的病理特征，以BLM诱导肺纤维化小鼠模型和S6刺激下正常肺成纤维细胞NLFB、人胚胎肺成纤维细胞MRC5为评价载体，观察益气活血法代表方-补阳还五汤对IPF发病过程中mTOR蛋白活化及自噬失能的调控机制，探索补阳还五汤在肺纤维化治疗中的可能机制及临床应用价值。

肺纤维化属于纤维增殖性疾病的范畴，是由多种原因引起的弥漫性肺部炎性疾病，病变主要累及肺间质，也可累及肺泡上皮细胞及肺血管。目前发病机制尚未明确，又无特殊有效的治疗方法。诸多研究表明，在肺纤维化形成过程中，自噬并未被激活，自噬不足、缺陷，可以导致肺纤维化形成加快，mTOR蛋白是细胞生长和增殖的重要调节因子，可以感受TGF-β信号转导，与多种纤维化疾病密切相关，其介导的胞内自噬机制在肺纤维化病理过程中发挥着重要的桥梁作用。根据肺纤维化的临床表现及病证转化，中医将其归属为“肺痹”、“肺痿”等范畴，肺肾气虚，邪气入中为病因，气虚血瘀为主要病机，且贯穿发病始终，因此益气活血则为治疗肺纤维化的基本大法。本研究在中医理论指导下，基于经典的细胞能量代谢“自噬”机制，以mTOR蛋白为切入点，围绕肺纤维化中肌成纤维细胞转分化的病理特征，以BLM诱导肺纤维化小鼠模型和p-S6刺激下正常肺成纤维细胞NLFB、人胚胎肺成纤维细胞MRC5为评价载体，观察益气活血法代表方-补阳还五汤对IPF发病过程中mTOR蛋白活化及自噬失能的调控机制。动物实验结果显示：补阳还五汤能够减缓肺纤维化小鼠肺组织病理形态学改变，有效抑制早期的肺泡炎和中后期的纤维化，抑制α-SMA、mTOR、S6、p-S6、p62的表达，增强肺组织内自噬表达数。体外细胞实验结果显示：补阳还五汤含药血清能够有效抑制HFL1、MRC5细胞中α-SMA、p-S6蛋白的表达，促进HFL1、MRC5细胞中PTEN、ULK1的表达。证实了“补阳还五汤治疗肺纤维化的多靶点调节作用可能与其抑制了mTOR蛋白的活化，进而促进胞内自噬机制有关”的假说。