一种新型内源性多肽PDAEP调控子宫内膜癌恶性进展的作用与机制研究

PDAEP, an endogenous polypeptide identified by mass spectrometry, is differentially lower expressed in human endometrial cancer tissue and its function remains unknown. Our primary results showed PDAEP can inhibit EC cell proliferation and migration, and promote cell apoptosis in vitro and can suppress tumor growth and metastasis in vivo by down-regulation NF-κB signaling pathway, presenting the potential therapeutic effect on EC. This study aims to analyze the expression and the role of PDAEP in human endometrial cancer. Therefore, a series of in vitro experiments, i.e. proliferation, migration, apoptosis assay and in vivo tests, i.e. xenograft model and metastasis model are both included to verify the possibility and feasibility of PDAEP targeting EC progression. Pull down experiments followed by Rescue experiments will be performed respectively to demonstrate the complete profile for EC progression by which PDAEP is involved. Chemical modifications, through which the stability and activity are improved for PDAEP are also considered in these experiments. Overall, this study will provide a new strategy for EC treatment.

PDAEP是我们借助多肽组学筛选获得的一条功能未知、在子宫内膜癌（EC）组织中差异低表达的内源性多肽。前期研究发现，PDAEP可以抑制EC细胞的增殖和侵袭迁移，促进细胞凋亡；动物实验显示，PDAEP可以抑制肿瘤的生长和侵袭转移；进一步转录组学分析和实验揭示PDAEP可能通过负调控NF-κB信号通路发挥抗EC作用。本研究拟通过临床样本分析PDAEP在不同期别EC组织的表达规律，揭示其与EC恶性进展的相关性；通过体外实验明确PDAEP对不同EC细胞系增殖、凋亡和侵袭转移的影响；通过pull-down等实验寻找其作用靶蛋白，并以NF-κB信号通路为线索，系统阐明PDAEP作用的分子机制；通过动物实验，论证PDAEP对EC发展和侵袭转移的影响与机制，系统论证PDAEP治疗EC的可能性；从化学修饰角度出发，寻找提高PDAEP稳定性与活性的方法。研究若获成功，有望为EC的治疗提供新选择。

子宫内膜癌（EC）严重威胁女性健康，多肽组学及高通量测序的发展为深入挖掘影响EC恶性进展机制、获得具有潜在治疗价值的生物靶点提供了新线索。本课题通过收集EC癌组织标本首先行液相色谱⁃串联质谱获得EC特异性内源性多肽，借助生物信息学方法筛选具有潜在活性的目的多肽，使用CCK⁃8、Transwell及划痕实验验证多肽对EC细胞增殖、侵袭、迁移的影响，并以PCR、WB方法观察多肽对Wnt/β-catenin/EMT通路相关分子表达的影响。继而，采用高通量RNA测序获得差异表达环状RNA（circRNAs），以EC细胞系经RT-qPCR初步验证差异表达circRNAs，并扩大临床样本验证锁定差异靶标circRNA。构建过表达质粒转染EC细胞，分别以CCK-8、克隆形成实验以及Transwell、划痕实验检测其对EC细胞增殖、迁移侵袭的影响。最后，通过Primer 2.0软件分析目的circRNA翻译多肽潜能。共鉴定获得近400条多肽，其中序列为IQGITKPAIR的多肽对应前体为Histone H4，无论蛋白还是RNA水平均在EC组织中高表达，并与EC分期正相关、与生存率负相关，故将其锁定为目的多肽PDAEP。其对HEC-1-A、Ishikawa细胞的增殖、侵袭、迁移有明显抑制作用，且作用后Vimentin、β-catenin mRNA及蛋白水平均显著降低，而E-cadherin则上调。共计获得差异表达circRNAs19条，在EC细胞系中筛得4条circRNAs，进一步扩大临床样本在19个正常子宫内膜和32个EC组织中验证，结合与患者临床FIGO分期相关性分析，锁定CircABHD2作为目的circRNA。体外实验结果显显示，其可显著抑制HEC-1-A、Ishikawa细胞增殖、克隆形成、迁移侵袭能力。而Primer软件亦显示，其存在预测的开放阅读框和内部核糖体进入位点，具有翻译多肽的必要条件。综上，课题组认为以质谱组学结合生信分析行EC内源性功能多肽的筛选是可行的。通过调变Wnt/β-catenin/EMT通路，PDAEP在体外有抑制EC细胞增殖、侵袭和迁移的抗肿瘤活性，具有潜在的诊疗应用价值。而circABHD2在EC组织及细胞系中的显著差异表达，并与分期相关，且在体外有发挥抗EC活性，尤其具有翻译多肽的潜能。两者结合可作为调控EC恶性进展机制研究的下一步方向。