miR-148b调控DNMT1遏制子宫内膜癌恶性进展的机制研究

Endometrial cancer is one of the most common gynecologic malignancy and is increasing in incidence in China.Metastases and relapses are the leading motality factor in endometrial cancer.Thus,we are calling for a more accurate marker for diagnosis and prognosis of endometrial cancer.MicroRNAs(miRNAs), which bind to the promoter region of targeting mRNA, inhibit gene transcription and play an important role in cancer progression and metastasis,as well as in endometrial cancer.In the preliminary experiments, we have demonstrated that miR-148b was obviously down-regulated in endometrial cancer.DNA methyltransferase 1 (DNMT1),as one of its target genes,was obviously up-regulated in endometrial cancer and was negatively related with miR-148b.DNMT1,which modulates the maintenance of tumor suppressor genes such as E-cadherin's hypermethylation,acted as an oncogene in many kinds of cancer.Based on preliminary basis and research background,we propose a hypothesis:miR-148b attenuating the epithelial-mesenchymal transition of endometrial cancer by directly targeting DNMT1,might be regarded as the crucial mechanism in the aggression of endometrial cancer. This study revealing the role of miR-148b-DNMT1 axis should shed new lights to the explorations of mechanism for endometrial cancer.Moreover,it might provide a novel promising approach for combined therapy and a new marker for prognosis of endometrial cancer.

子宫内膜癌的发病率在我国呈上升趋势。由于复发、转移型子宫内膜癌预后较差，临床亟待新的具有预测和治疗价值的分子靶标出现。miRNAs作为一种细胞功能调控分子在肿瘤的发生发展中具有重要作用。在我们的前期工作中，首次发现了内膜癌组织中miR-148b水平显著下降，并发现DNA甲基转移酶1（DNMT1）是受miR-148b调控的靶基因之一，两者在内膜癌中的表达呈负相关性。由于DNMT1在其它肿瘤中已被报道能通过甲基化修饰而沉默E-cadherin等抑癌基因，为此本课题将通过一系列细胞、分子生物学实验和动物学实验，阐明miR-148b-DNMT1轴在内膜癌侵袭转移中的重要作用，并且探索这一作用是否是通过影响了内膜癌细胞上皮-间质转化(EMT)而实现。本课题研究成果将拓展人们对miR-148b和DNMT1在下游相关抑癌基因沉默及内膜癌细胞恶性播散中的认识，并为内膜癌的分子分型和靶向治疗提供潜在的靶点。

子宫内膜癌基因组甲基化状态异常与疾病进展、患者预后显著相关。DNA甲基转移酶1(DNMT1)是调控肿瘤细胞DNA甲基化的重要分子，且DNMT1本身可以受到上游微小RNA（miRNAs）的调控。然而，miRNAs分子通过影响基因组甲基化状态调控内膜癌进展的具体分子机制尚不明确。.在本课题进行过程中，我们首先重点研究了DNMT1上游分子miR-148b在内膜癌肿瘤细胞中的表达水平调控机制。通过流式分选肿瘤组织成纤维细胞结合PCR检测，我们发现与正常成纤维细胞相比，肿瘤相关成纤维细胞（CAF）可以下调内膜癌细胞中miR-148b中的表达水平。同时，我们在研究过程中发现，微环境中CAF与内膜癌细胞之间的交叉对话由外泌体介导。体内外功能实验证实，内膜癌细胞中miR-148b表达下调，促进肿瘤细胞恶性生物学行为，加速内膜癌转移侵袭。PCR及Western-blot检测提示，miR-148b下调引起内膜癌细胞EMT通路激活。课题前期工作中已通过双荧光素酶报告系统检测证实，miR-148b分子与DNMT1分子3’UTR区域存在结合位点。为进一步验证DNMT1分子功能，我们通过敲低内膜癌细胞中DNMT1分子表达水平，结合功能实验发现，抑制DNMT1分子表达可以逆转内膜癌迁移侵袭能力。.我们的研究结果提示，肿瘤微环境中CAF来源外泌体可以介导内膜癌细胞中miR-148b表达下调，进而引起下游靶基因DNMT1分子表达升高，并最终促进内膜癌转移进展。综上，通过本项目的研究，我们揭示了肿瘤微环境基质细胞-外泌体-miRNA-DNMT1-内膜癌细胞恶性转化这一全新功能调控通路，为内膜癌诊治提供了新的干预靶点和研究方向。.我们的研究结果提示，肿瘤微环境中CAF来源外泌体可以介导内膜癌细胞中miR-148b表达下调，进而引起下游靶基因DNMT1分子表达升高，并最终促进内膜癌转移进展。综上，通过本项目的研究，我们揭示了肿瘤微环境基质细胞-外泌体-miRNA-DNMT1-内膜癌细胞恶性转化这一全新功能调控通路，为内膜癌诊治提供了新的干预靶点和研究方向。