ABCA1介导载脂蛋白A1上调tristetraprolin抗动脉粥样硬化炎症激活的研究

申请者前期已证实载脂蛋白A1（apoA1）通过其受体ABCA1上调tristetraprolin（TTP）表达，并促进多种炎症因子mRNA降解。但炎症状态下TTP被迅速磷酸化而失活，apoA1如何调节TTP去磷酸化及其体内抗As炎症激活的机制？尚不明确。前期研究显示，apoA1/ABCA1上调钙调磷酸酶（CaN）活性，而CaN具有抑制TTP磷酸化的潜在效应。为此，本项目拟建立LPS诱导的巨噬细胞炎症模型和apoA1过表达新西兰兔球囊损伤As模型，进一步探讨apoA1/ABCA1通过CaM/CaN途径促进TTP去磷酸化的分子机制，并观察apoA1对As斑块中ABCA1、TTP、STAT3和CaN表达、炎症细胞浸润及炎症因子mRNA降解的影响。本项目有望进一步揭示apoA1抗As炎症激活的机制，阐明apoA1/ABCA1调节TTP功能的信号途径，发现ABCA1激活胞内信号途径介导抗炎的新机制。

本项目以apoE基因敲除（apoE-KO）小鼠、小鼠腹腔巨噬细胞和THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，通过体内外两个层面观察apoA-I对脂多糖（LPS）诱导apoE-KO小鼠动脉粥样硬化（As）病变、血管壁巨噬细胞浸润和炎症因子表达的影响，并在体内外探讨三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）及其激活的胞内信号途径JAK2/STAT3/ Tristetraprolin（TTP）信号途径在此过程中的作用。本项目主要完成了以下工作：1、通过皮下注射LPS，建立起apoE基因敲除（apoE-KO）小鼠慢性炎症模型，该模型表现更明显的体内炎症因子水平和As病变程度；2、构建了2型腺相关病毒（rAAV2）为载体的人apoA-I表达体，通过尾静脉注射，构建了过表达人apoA-I的apoE-KO小鼠；3、通过形态学和分子生物学技术，发现过表达apoA-I抑制LPS诱导的apoE-KO小鼠体内炎症反应、脂质蓄积和As进展，过表达apoA-I上调ABCA1表达、激活JAK2/STAT3信号途径，并上调炎症因子RNA结合蛋白TTP，从而抑制炎症因子的表达。4、在体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞和THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞，apoA1激活ABCA1介导的JAK2/STAT3信号途径，并促进TNF-α、IL-1β等炎症因子的mRNA降解。本项目还发现，植物同源结构域指蛋白2（PHF2）是氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞核因子kB激活的关键表观遗传调节因子，apoA1/ABCA1具有调节PHF2表达的潜在效应。具有降血脂作用的异哇琳类生物碱-小檗碱能上调THP-1 巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1 的表达，并促进细胞内胆固醇流出，这种效应与调节LXR-α 乙酰化有关。