miR-145在TR4调控前列腺癌CD133阳性细胞化疗耐药中的作用机制

Chemoresistance of castration-resistance prostate cancer is one of the main clinical obstacle.It was proved that the existance of CD133 positive cells and abnormal expression of miRNAs in cancer tissue were the important factors that contribute to cancer chemoresistance.In our preliminary study, we found that testicular nuclear receptor 4(TR4) could modulate chemoresistance through mediate the expression of Oct4 in CD133 positive cells of prostate cancer C4-2 cell line .further more,TR4 can also inhibit the expression of miR-145 in CD133 positive cells.and low expression of miR-145 can stimulate the expression of Oct4.We speculate that,dispite that TR4 can directly modulate the expression of Oct4, it can also inhibite the expression of miR-145 and further modulate the expression of Oct4 in CD133 positive prostate cancer cells,which is the main cause of chemoresistance in prostate cancer.However,this mechanism needs to be further verified in vitro and in vivo.

去势抵抗性前列腺癌的化疗耐药是临床面临的难题之一。目前认为肿瘤组织中存在的CD133阳性细胞及miRNA表达异常是肿瘤化疗耐药的重要因素。我们的前期研究发现，在前列腺癌C4-2 细胞株的CD133阳性细胞中，睾丸孤核受体4(TR4) 通过调控Oct4的表达调节细胞的化疗耐药性。同时TR4还可抑制C4-2 CD133细胞中miR-145的表达水平。而miR-145表达降低可使Oct4的表达升高。因此，在CD133阳性前列腺癌细胞中，TR4可能还通过抑制miR-145的表达，间接影响Oct4的表达而发挥化疗耐药功能。为此，需要在此基础上，采用多种分子生物学技术，从细胞水平及动物水平进一步证实这一作用机制。从而进一步明确TR4在前列腺癌CD133阳性细胞中的化疗耐药机制。

TR4可调控去势抵抗性前列腺癌（CRPC）CD133+细胞中OCT4的表达，进而影响CRPC的化疗耐药，但是否有其他机制参与尚不明确。我们进行了如下研究:(1):采用生物信息学方法分析引起CRPC的miRNA及与CPRC化疗抵抗相关miRNA的数量，对两者中均有差异表达的miRNA经定量PCR验证；(2): 过表达或抑制CRPC细胞及CD133+细胞中TR4的表达，采用定量PCR、Western Blot 检测感兴趣的miR145、OCT4的变化；Luciferase、chip试验等验证miR145是否受TR4调控，OCT4是否受miR145的调控；(3):检测C4-2与C4-2 CD133+细胞在抑制TR4表达后对多西他赛敏感性变化；(4):改变不同前列腺癌细胞株中miR145的表达对OCT4表达的影响；(5):分别或联合抑制CRPC细胞中TR4与miR-145后，检测CRPC细胞化疗敏感性。(6):制作动物移植瘤模型，给予多西他赛，体内验证(5);(7):TR4影响前列腺癌进展的其他机制。结果:(1):生物信息学分析及定量PCR结果提示CRPC中，有4个miRNA参与化疗耐药。其中miR145是感兴趣的目标;(2):CRPC及CD133+细胞中，TR4高表达而miR145低表达，miR-145受TR4的反向调控，OCT4受miR145调控;(3):抑制C4-2与C4-2 CD133+细胞TR4表达，细胞对多西他赛敏感性增加;(4):不同CRPC细胞中，miR145表达增加，则OCT4表达下降。(5):抑制TR4后，PC-3、C4-2、DU145对多西他赛的敏感性增而抑制miR-145，细胞对多西他赛的敏感性下降;(6):PC-3细胞制作的祼鼠移植瘤获得同样结果。以上研究结果证实，在去势抵抗性前列腺癌及前列腺癌CD133阳性细胞中，miR145受TR4调控，进而调控OCT4，影响CRPC及CD133+细胞对化疗的敏感性。这是CRPC化疗耐药的新机制，也圆满完成了课题任务。此外，我们还发现TR4通过调控CD133+前列腺癌细胞中EZ2H的表达水平，影响转移相关基因表达，从而促进CRPC的浸润与转移，这是TR4参与前列腺癌转移的新机制；TR4还可影响CARMEN的表达，而CARMEN在前列癌中的作用不明，为进一步研究CARMEN在CRPC细胞的作用提供新基础。