CD20在慢性淋巴细胞白血病细胞中低表达机制的实验研究

Rituximab is a chimeric monoclonal antibody to the surface antigen CD20, and binding it to kill B lymphoma cells. In clinical practices, some chronic lymphocytic leukemia (CLL) patients are primary or secondary rituximab resistance. The low or deficient expression of CD20 may contribute to such resistance. Our previous study suggest that epigenetic (DNA methylation) may impact on the CD20 protein expression. Therefore, the project intends to: ①detect CD20 of CLL cells at genome level, including gene mutations, allelic loss, DNA methylation; ②explore epigenetic (DNA methylation, histone acetylation and miRNA) mechanism of regulation of CD20 expression on CLL cells in vitro; ③raise CLL cells CD20 expression by applications of demethylation and deacetylation drugs, and explore the new ways to overcome Rituximab resistance in CLL patients. By this study, understanding mechanism of low CD20 expression on CLL cells and Rituximab resistance is expected to screen patients applicable for Rituximab and provide a theoretical basis for overcomimg Rituximab resistance.

CD20为利妥昔单抗(Rituxiamb)作用靶点，Rituximab通过CD20杀伤B淋巴肿瘤细胞。临床发现部分慢性淋巴白血病(CLL)患者对Rituxiamb原发或继发耐药，CLL细胞表面CD20抗原低表达或缺失成为最可能的机制之一。我们的前期研究提示：表观遗传学(DNA甲基化)可能参与CD20表达调控。因此，本项目拟：①检测CLL患者CD20在基因组水平的异常，包括基因突变、等位基因缺失、DNA甲基化等；②体外实验研究CLL细胞中表观遗传学(DNA甲基化、组蛋白乙酰化和miRNA)对CD20抗原表达的调控机制；③应用去甲基化、去乙酰化药物上调CLL细胞CD20表达，探索CLL患者克服Rituximab耐药的新途径。通过研究深入了解CLL细胞CD20低表达和对分子靶向药物Rituximab耐药机制，有望提前筛选适用Rituximab的患者人群，为克服Rituximab耐药提供理论依据。

CD20为利妥昔单抗(Rituxiamb)作用靶点，Rituximab通过CD20杀伤B淋巴肿瘤细胞。临床发现部分慢性淋巴白血病(CLL)患者对Rituxiamb原发或继发耐药，但具体机制尚未阐明。CD20基因编码区通过PCR在92例新诊断的CLL患者和200名健康供者标本中扩增。在CLL患者的外周血标本中进行CD20表达检测。通过流式细胞术检测CD20表达和荧光强度的比例。在4.35％（4/92）和9.78％（9/92）的新诊断的CLL患者中存在外显子-3c.246C> T（rs17155019）和外显子-4c.632C> T（rs2070770），在其余的外显子中没有发现突变。 rs2070770的C / C基因型和C等位基因的频率显著高于正常对照（90.22％vs 81.00％，P = 0.04; 95.11％vs 90％，P = 0.04）。基因型与CLL发展无显著关系（P> 0.05），然而，rs2070770的C等位基因可能与CLL相关（P = 0.04，OR = 0.46,95％CI = 0.22-0.98）。CD20 mRNA的表达、CD20的比例和强度在两个多态性位点的基因型之间没有显著差异（P> 0.05）。CLL的CD20低表达与CD20基因编码区的突变无关。其他机制，如启动子甲基化，可能导致CD20的低表达。