携CXCL12抗体靶向超声微泡在体评估卵巢癌微环境的实验研究

A lot of research confirmed that chemokine CXCL12 in ovarian cancer microenvironment plays an important role in tumor roliferation,infiltration,.vascularization and metastasis ,and can be used to evaluate prognosis、predict drug resistance. But at present, the CXCL12 is detected mainly in vitro through immunohistochemical and molecular biology examination and evaluated hardly in vivo. Therefore, how to apply noninvasive technique to evaluate the CXCL12 is a difficult problem to be solved in clinical.This study based on the distribution characteristics that CXCL12 is mainly high expressed by new blood vessels epithelium and lymphatic epithelium of ovarian cancer microenvironment，and based on principle that ultrasound microbubble is blood pool imaging; To establish people ovarian cancer subcutaneous transplantation tumor model in nude mice and make targeted contrast agents through directly connected CXCL12 antibody and microbubble，to antigen-antibody reaction and correlation analysis of Molecular Biological Detection，this study,in vivo, target recognize and quantitative evaluate the CXCL12 in ovarian cancer micro environm through tail vein injection of targeted contrast agents，The final purpose of this study offers an in vivo and noninvasive new molecular imaging methods for assessment ovarian cancer microenvironment.

肿瘤微环境被认为是攻克肿瘤的有效研究靶点。大量研究证实卵巢癌微环境中趋化因子CXCL12在肿瘤细胞的增殖、新生血管的形成、转移方面起到重要作用，可以评价预后、预测抗药性。但目前卵巢癌微环境中CXCL12含量的检测主要是通过处死动物后取标本行离体检测，难以用于临床的在体评价。本研究基于卵巢癌微环境中CXCL12主要由新生血管上皮高表达的分布特点，及超声微泡是血池显影剂的原理；通过建立裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤模型和制备携CXCL12抗体的靶向超声微泡，经尾静脉注射，通过体内抗原抗体反应，实现卵巢癌微环境中CXCL12的在体靶向识别，将造影剂灌注参数与瘤块的分子生物学检测、新生血管密度、瘤细胞分化程度、远处转移灶等离体指标进行相关性分析，进一步探寻反映卵巢癌微环境中CXCL12含量变化的最敏感超声造影剂参数，为临床在体无创评估卵巢癌微环境提供一种新的分子影像学手段，国内外未见报道。

大量的研究证实卵巢癌微环境中趋化因子CXCL12在肿瘤细胞的增殖、肿瘤新生血管的形成、肿瘤的转移方面起到重要的作用，可以评价预后、预测抗药性。但目前卵巢癌微环境中CXCL12含量的检测主要是通过处死动物后取标本行离体检测，难以用于临床的在体评价。因此，如何在活体状态下实现卵巢癌微环境中CXCL12含量的评价，是临床目前亟待解决的问题。本研究通过建立裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤模型和成功制备CXCL12靶向微泡造影剂，经裸鼠尾静脉注射，实现卵巢癌微环境中CXCL12的靶向识别和在体定量评价。结果成功建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型，瘤体出现时间平均5天，成瘤率为 96. 36%。超声造影成像30-40天组瘤体平均大小（1.4±0.45）cm、（1.6±0.66）cm，为后续卵巢癌的在体评价提供了可靠的动物实验模型；成功制备靶向超声造影剂，CXCL12抗体靶向超声微泡在体外可与人卵巢癌SKOV3细胞牢固结合, 较普通造影剂组具有较高的结合率和稳定性（P＜0.05）；超声造影成像显示靶向造影组(mbc)峰值强度（PI）均大于非靶向造影组(mbt)，在10、20、30、40ｄ组间差异有统计学意义（P＜0.05）； mbc达峰时间（TTP）均小于mbt，各组间差异有统计学意义（p＜0.05）；各组新生血管密度（mvd）差异有统计学意义（p＜0.05），靶向造影组PI值与mvd在20、30ｄ组间呈正相关（ｒ＝0.673、0.69，p＜0.05），mbt组TTP值与mvd在20、30ｄ组间呈负相关（ｒ＝－0.671、－0.707，p＜0.05）。携CXCL12的靶向超声造影能够在体评价卵巢癌组织内CXCL12的表达水平，靶向超声造影一定程度上可实现在体评价肿瘤新生血管情况。