海洋微生物低温蛋白酶温度稳定性的定向进化

蛋白酶作为一种洗涤添加剂，对降低洗涤能耗和减少磷对环境的污染有重要意义。目前，通过基因工程菌发酵大规模廉价生产用蛋白酶技术已取得突破性进展，但为减少产品在加工、贮藏及应用过程中的损失，蛋白酶的热稳定性仍有待进一步提高，如能通过蛋白质工程在分子水平上对蛋白酶进行改造，使蛋白酶本身就具有良好的热稳定性是提高蛋白酶应用效率的关键技术。本项目拟从自行分离的海洋微生物蛋白酶高产菌株假单胞杆菌QD80的蛋白酶基因出发，采用易错PCR和改良DNA改组技术获得蛋白酶基因的突变库，通过高通量酶活测定和比较，筛选出具有表达高热稳定性蛋白酶突变子，在较短时间内实现蛋白酶热稳定性的定向进化，获得活性高、稳定性好的新酶。同时建立一套以DNA改组技术为主要手段的工业酶定向进化和筛选技术体系，为定向进化技术在工业生物催化剂创制领域中的应用提供新理论和实践基础；并为DNA改组技术在生物进化过程中的作用提供新的实验证据。